刺槐线粒体的提取方法研究.pdf

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1、内蒙古农业科技2013(4)：28—29InnerMongoliaAgriculturalScienceAndTechnology刺槐线粒体的提取方法研究齐振华1，李迎春1，黄凤兰2，刘立琨3孟凡娟1(1．东北林业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150040；2．内蒙古民族大学生命科学学院，内蒙古通辽028000；3．韩国国立江原大学医生命工学医生命学院，韩国春川200-701)摘要：文章介绍了一种密度梯度离心的方法提取刺槐线粒体。该线粒体提取方法包括以下步骤：(1)材料的研磨，获取匀浆；(2)差速离心去除细胞碎片等杂质

2、；(3)加悬浮液，密度梯度获取较纯的线粒体沉淀。结果表明，采用这种方法得到的线粒体完整性较好，可以用于线粒体功能的研究．以及为线粒体蛋白质组学的研究奠定基础。关键词：刺槐；线粒体；提取；密度梯度离心中图分类号：S792．27文献标识码：A10．3969／j．jssn．1007—0907．2013．04．014文章编号：1007-090712013)04—0028—02TheExtractMethodofRobiniaPseudoacaciaMitochondriaQIZhen-hua(CoHegeofLifeScien

3、ce，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China)Abstract：Amethodfortlleisolatedandsub-fraetionationofthemitochondriaofRobiniapseudoacaciafromphnttissueisdescribed．Themethodcomprised：(11theblendertissuehomogenizationandthehomogenateoftissueWasobtained；(2)differ

4、entcentfifugationtoremoveimpuritiessuch8scellfragments；(3)addsuspension，then，densitygradienttoobtainrelativelypuremitochondriaDrecipitation．ResultsshowedthattheintegrityofmiwchondriMWasbetterbyusingthismethodandsuitableforstuayonmitochondriMfunctionaswellaslayth

5、efoundationforthestudyofmitochondrialproteomics．Keywords：RobiniapseudoacaciaL；mitochondria；extraction；densitygradienteentrifugation刺槐(RobmiapseudoacaciaL．)又名洋槐，属蝶形花科刺槐属的落叶乔木。原生于北美洲，现被广泛引种到亚洲、欧洲等地。刺槐(RobiniapseudoacaciaL．)是一种优良的绿化造林树种，耐盐能力较强．在盐碱地的土壤改良中发挥着重要的作用，同时

6、，四倍体刺槐的引进更是大大促进了我国的水土保持、防风固沙和环境改善。四倍体刺槐也称多倍体刺槐，原产于韩国，1997年引入我国。较普通刺槐而言，其叶片肥大，富含的维生素及矿物质较多，耐烟尘、耐干旱、耐盐、耐低温能力强等优良特性，具有较高的生态价值。线粒体是植物有氧呼吸的主要场所．它通过氧化磷酸化进行能量转换．合成能源物质一三磷酸腺苷(A。rP)，为细胞各项活动提供90％以上的能量．是细胞能量代谢的中心，因此有“细胞动力工厂”之称。近年来发现，线粒体还具有调控细胞凋亡、参与细胞信号转导、生成活性氧等其他重要的生物学功能。线

7、粒体的许多生理生化功能与植物抗逆性相关．如线粒体是活性氧产生的主要部位．而活性氧与植物的抗逆性有关。植物正常条件下产生的活性氧fROS)不会对植物造成严重伤害，但胁迫环境下植物细胞结构中ROS大量积累会造成叶绿素、膜质、蛋白质和核酸的氧化伤害从而破坏正常的生理代谢。线粒体中含有细胞色素和抗氧化酶系统．在盐胁迫条件下．植物的线粒体能够产生较多的细胞色素和提高保护酶活性来清除体内多余的ROS，从而减轻盐胁迫给自身带来的伤害。l材料和方法1．1材料供试的两年生刺槐种根购自北京林业大学。3月中旬将种根定植于直径21cm、高21

8、cm的塑料营养钵中，苗土的培养基质为沙土(土和沙的比例为2：1)。放置于东北林业大学温室内，日温27～330C．夜温15～22％，相对湿度为70％，然后进行常规管理。1．2试剂配制线粒体提取液配制：5rampH值7．5HEPES，5raM正己酸，0．3％BSA，0．3M蔗糖，10ramB—ME，20raMEDTA，30mMNa—A