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《极端嗜盐菌培养基的整理.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、嗜盐古生菌AJ6的分离及系统发育分析菌种分离和富集培养采用RM培养基(gdL):NaCI250.0,无水MgSO49.7,柠檬酸钠3.0,KC12.0,无水CaChO.2,细菌蛋白腺(L37)10,pH7.0,固体培养基加琼脂15L水样直接加到液体培养基川(水样：液体培养基，1:10),37°C、120romin光照振荡培养12d,此时培养基呈红色，取培养基100〜200uL涂布平板，37°C光照培养，待菌落长出后，挑取单菌落反复划线纯化3至4次，将最后一次挑取的单菌落接入液体培养基，光照振荡培养7d待用L巴里坤湖和玛纳斯
2、湖嗜盐菌的分离及功能酶的筛选1.1.4培养基%1CM培养基(PL):Casaminoacids7.50g,Yeastextract10.OOg,Na3-citrate3.00g,KC12.00g,MgSO4•7H2020.00g,FeSO4・7H200.05g,NaC1200.00g,pH7.2。%1HM培养基(PL)(Ventosa,etal.,1982):NaC1100.0g,KC12.0g,MgSO4・7H2O1.0g,CaCl2・2H2O0.36g,NaHCO30.06g,FeC13Tr,Protease-pept
3、oneno.35.0g,Yeastextract10.0g,Glucosel.0g,pH7.2〜7.4。%1APA培养基(PL):NaC120.0g,KH2PO42.0g,MgSO4・7H201.0g,Protease-peptoneno.35.0g,Yeastextract,5.0g,Glu2cosel.0g,Na2CO3lO.OOg,其中,Na2CO3与培养基分开灭菌，待温度降到55°C后混匀。pH9.5〜10。1.2.1菌株的分离与保藏水样经0.45um和0.22um滤膜过滤，滤膜加入液体培养基震荡均匀后，梯度稀释涂
4、布平板。37°C光照培养5〜14d,经反复划线纯化，直至获得单菌落。菌株采用液体石蜡法4°C和甘油管法80°C长期保藏。灌东盐场嗜盐细菌的分离与初步鉴定1.2培养基1.2.1收集培养基Payne(g/L)o酪素水解物7.5,酵母浸出物10,柠檬酸钠3,KC12,NaCl200,MgSO4•7H2020,FeSO4・7H200.05,MnSO4・4H200.00025,pH7o1.2.2富集培养基Gibbons(g/L)。酪素水解物5,酵母浸出物10,蛋白腺5,KC12,NaCl200,MgS04・7H2O20,固体培养基加
5、琼脂18〜20,pI17o1.2.3修饰的牛肉膏蛋白腺培养基(g/L)°牛肉膏5,蛋白腺10,NaCl200,KC15,MgS04・7H202.5°1.2.4牛奶-盐-琼脂培养基。(1)脱脂牛奶150mL,于0.55kg/cm2压力下灭菌30min；(2)无机盐水溶液30mL(含MgS04-7H203g,KN030.6g,NaCl60g和微量柠檬酸铁)，于0.55kg/cm2下灭菌30min；(3)琼脂溶液120mL(内含水解酪蛋白l・5g,甘油2g,琼脂4.5g),于0.55kg/cm2下灭菌30mino在70°C左右将
6、(2)和(3)混合，调pH至&4,然后混入成分(1),摇匀，倒平皿。1.3富集与分离收集菌体和富集培养采用Payne培养基，将样品底泥直接接种于装有50mL培养液的250mL三角瓶中，置于摇床上振荡培养7d(220r/min),温度控制在37°CO纯种分离采用固体Gibbons培养基平板划线分离倒置于温箱37°C培养7d。1.4形态观察在牛奶-盐-琼脂平板上划线，37°C培养10d,观察单菌落形态特征。单个菌体采用革兰氏染色，测暈其大小，并进行运动性观察及鞭毛染色。1.5生长特性测定1.5.1生长盐浓度测定。改变牛肉膏蛋白
7、腺培养基中NaCl浓度(0.42〜5.42inol/L),2%接种量接种，37°C振荡培养7d,适当稀释后测定600nm的0D值。1.5.2生长温度测定。将菌种同样接种于牛肉膏蛋白腺培养基中，在不同温度梯度(25〜55°C)的水浴中培养7d,以同样方法测定生长情况C
