J亚群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的构建及其致.pdf

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1、!"卷#期微生物学报’()*!"/(*#$%%"年&月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$+,-.$%%"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!亚群白血病病毒"#$%$%株感染性克隆化病毒的构建及其致病性张纪元崔治中"丁家波姜世金（山东农业大学动物科技学院泰安$04%42）摘要：采用FGH方法分#段扩增出+亚群白血病病毒/I%4%4株的前病毒=J/K，FGH产物经克隆后顺次连接，获得一个含有完整KL’3+

2、前病毒=J/K的重组质粒，命名为MKL’3+3/I。将此质粒J/K纯化后转染鸡胚成纤维细胞，以针对KL’3+的单克隆抗体+98对转染后的细胞作间接免疫荧光反应，证明获得了具有感染性的病毒。测定原始野毒和分子克隆化病毒的半数组织感染量（1GNJ"%），分别人工接种4日龄商品代肉鸡并隔离饲养40周。接种野毒组死亡率为$&O，髓细胞瘤发病率为$!O。接种分子克隆化病毒组死亡率为$$O，髓细胞瘤发病率为$$O。结果表明，克隆化病毒具有天然病毒的致病性并对肉用型鸡表现致瘤性。关键词：+亚群白血病病毒，感染性克隆，

3、致病性中图分类号：P8##文献标识码：K文章编号：%%%43&$%8（$%%"）%#3%!#03%!禽白血病病毒（!"#$%&’()*+#+"#,(+，KL’）是在鸡%材料和方法群中普遍存在的一群反转录病毒，鸡的经典白血病主要是由外源性的K和Q亚群引起，少数由G和J%&%材料［4］［2，4%］亚群引起。蛋鸡群中已基本上消灭了这类经典的%&%&%毒种和单克隆抗体：/I%4%4株KL’3+是外源性KL’，鸡群中只有无致瘤性的9亚群的内源$%%4年由本实验室从宁夏回族自治区某父母代种性KL’感染。但在4822

4、年，英国从肉用型鸡群中鸡场分离到；所用的单克隆抗体为抗KL’3+的UM2"［8］分离到一株新的禽白血病病毒，根据病毒干扰和血的特异性单克隆抗体+98。清中和试验分析确定了该病毒是一类不同于已知的%&%&’TF5鸡胚、鸡胚成纤维细胞（G95）：TF5鸡K39亚群的禽白血病病毒，称之为+亚群（KL’3胚，购自济南斯帕法斯家禽有限公司。取孵化至8［$］+）。随后，该病毒曾蔓延到所有养鸡国家，使养鸡R44日龄的TF5鸡胚，无菌操作取出胚体，去眼、业面临一个相当严重的问题。我国直到4888年才喙、四肢和内脏，剪碎

5、，用S6-VW?液洗涤#次，加入［#］开始发现和证实KL’3+在我国的存在。":L%E$"O的胰酶，#0X消化4"R$%:;-，弃去上H/K病毒尤其是反转录病毒的一个非常显著清，吹打分散，细胞记数，分装，置于#0X含"OGY$特征就是病毒的H/K聚合酶缺乏校对机制，从而造的培养箱中培养，待长成单层后接种/I%4%4，继续［!R&］成遗传上的不稳定性和多样性。对一个高度变培养0R4%@后，提取组织J/K。异的病毒毒株来说，无论免疫压力的存在与否，在传%&%&(试剂：MZG42、FGH[;、1!J/K连接

6、酶、I3]6)、代过程中都可能不断形成遗传变异的毒株，即分离NF1]等均购于16[6H6公司；5N1G标记的抗鼠NU]到的病毒往往形成基因组上不完全相同的群体，即荧光抗体购于T;U:6公司；脂质体（L;M^.=6:;-.）购于由不同的“准种”（P,6?;?M.=;.?）组成的群体。因此，];Q=(QHL公司；质粒纯化试剂盒_;-;[;购于P;63寻求单一起源的KL’3+，对于研究病毒是非常重要U.-公司；L6T(6株/J’弱毒疫苗购于山东齐鲁动的。而反向遗传技术构建的感染性克隆所产生的病物保健品厂

7、；/J’灭活苗购于梅里亚公司。毒，就是这种单一起源的病毒群体。但到目前为止，%&’"#$%$%株)*+,!感染-./中前病毒01")KL’3+还只有原型株SFHT34%#的感染性分子克片段的扩增［0］隆。本研究则试图从KL’3+的中国分离株构建感G95在接种病毒并维持0R4%@后，将细胞洗涤染性克隆，并进一步研究分子克隆化病毒在肉用型后用胰酶消化收获，抽提，用乙醇沉淀J/K后室温鸡上的致病性。下自然干燥，溶解于适量19中，即为样品模板基金项目：国家自然科学基金（#%$0%%&%）"通讯作者。1.)：2&

8、3"#232$!4"&%；567：2&3"#232$!4!48；93:6;)：<<=,;>?@6,*.@,*=-作者简介：张纪元（4802A），男，山东安丘人，硕士研究生，主要从事动物分子病毒学研究。93:6;)：,-;B,.4&#E=(:收稿日期：$%%!34434&，修回日期：$%%"3%$3$#75W微生物学报7;卷!"#。根据已完成的#$%&’"()*)*株前病毒基因（C;!EEFGH$）各C!$，模板!"#约C)!$，!"