实验四 MS培养基的配制.doc

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1、实验四MS培养基的配制一、目的与要求1、掌握培养基配制流程。2、掌握高压灭菌锅、PH计、电子天平等仪器的止确使用方法。3、以小组为单位，每纽配制500ml培养基，并进行分装。二、实验原理培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养物质。培养基一般包括尢机盐、有机化合物和植物生长调节剂三大基本纽成成分。其各纽.分参与有机体的构造、代谢，且各组分在维持生物体内的平衡和调节形态发生和组织器官的建成具有重耍作用。目前已经研制出多种适宜各种培养材料生长的培养基配方，其中MS培养基山于其无机盐浓度较高较为全面，能够

2、满足多种植物组织培养对营养元素的需求而被广泛应用。三、材料、仪器与试剂1、实验用具：酸度计或pH试纸、电磁搅拌器、电炉、高压灭菌锅、微量移液器、移液管、量筒、容量瓶、培养瓶(三角瓶)、烧杯、标签2、试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸钿水、0.Imol/LNaOH,0.lmol/LHC1!1!3、培养基:MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+琼脂0.7%+蔗糖3%培养基、实验步21、称出规定数量的琼脂，置于一个不锈钢锅中，加入蒸懈水直到培养基最终容积的3/4,在电炉上

3、加热使之溶解。待琼脂溶解之后，加入规定数量的蔗糖，用玻棒搅拌均匀。若是耍配制液体培养基，则不加琼脂，也无须加热，I大1为蔗糖其至在微温的水中也能溶解。2、分别加入一定量的各种母液，包括植物生长调节剂和其他的特殊添加物。其中母液用量=培养基配方浓度/培养基母液浓度X培养基配制量植物生长调节剂原液用量=培养基配方浓度/植物生长调节剂原液浓度X培养基配制量3、加蒸饬水直到培养基的最终容积。4、充分混合之后,用0.lmol/LNaOH或HCI调节培养基的pH,pH通常可釆用PH度或精密pH试纸(pH5・4~7・

4、0)进行测定。5、把培养基分装到所选用的培养容器中，每个培养瓶分装培养基30ml36、用瓶盖或英他适宜的材料如铝箔或耐高温膜封住瓶口。注意事项1、1AA、GA等生长素和某些维生索山于高温下易分解，所在在髙温灭菌之后才能加入，一般采用灭菌水配成适宜浓度后，使这些物质的溶液通过孔径为0.45um的微孔滤器消毒后再加入。2、如果在操作期间培养基开始凝固，应将装培养基的容器置水浴中加热，只有当培养基为均匀的液态时才能分装或加入不能高温灭菌的生长素和维生素类物质。五、探究性试验建议以小纽为单位，进行培养基不同PI

5、I值梯度设计试验，以探究不同PII值和不同灭菌时间对培养基凝固的影响，每小纽设置四个处理，如下表：不同PH值对培养基凝固效果的比较PH值是否凝固备注4567六、实验报告及思考题1、根据实验撰写实验报告，报告内容主要包括：实验目的与要求，仪器、试剂及用具，MS培养基配制方法及注意事项。2、MS基本培养基如何配制？配制时有哪些注意事项？3、填写培养基配制登记表：培养基代号培养基体积培养基pH值使用对象备注培养基配制登记农计算:校核:配制:审批:配制日期: