野生大豆抗感大豆孢囊线虫材料内生细菌多样性分析-论文.pdf

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1、微生物学报ActaMicrobiologicaSinica54(8)：926—935；4August2014ISSN0001—6209；CN11—1995／Qhttp：／／journals．im．ac．cn／actamicrocndoi：10．13343／j．cnki．wsxb．2014．08．011野生大豆抗感大豆孢囊线虫材料内生细菌多样性分析武云鹏，史凤玉，M．ImranHamid，张瑞敬。，朱英波h河北科技师范学院生命科技学院，河北秦皇岛066600中国科学院微生物研究所，真菌学国家重点实验室，北京1

2、00101张家口市植物保护植物检疫站，河北张家口075000摘要：【目的】对抗感野生大豆材料根内生细菌的多样性进行比较分析，为研究野生大豆内生细菌与大豆孢囊线虫之间的相互关系奠定基础。【方法】在野生大豆抗大豆孢囊线虫3号生理小种筛选基础上，利用扩增核糖体DNA限制性分析(AmplifiedribosomalDNArestrictionanalysis，ARDRA)和16SrDNA克隆文库测序相结合的方法，对抗感野生大豆根系内生细菌多样性及群落结构进行分析。【结果】野生大豆根内生细菌分属于6大类群，其中变形菌

3、门(Proteobacteria)和厚壁菌f-1(Firmicutes)为优势类群，相对丰度分别为46．8％和13．6％，另外有少量的放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、酸杆菌门(Acidobacteria)、异常球菌一栖热菌门(Deincoccus—Thermus)和古细菌(Archaea)，18．8％克隆序列与环境中未培养细菌的16SrDNA序列有较高的相似性。野生大豆高抗材料内生细菌的多样性比高感材料更为丰富，且抗感材料内生细菌优势菌群存在明显差异，中慢生

4、根瘤菌(Mesorhizobiumtamadayense)、肠杆菌(Enterobacterludwigii)和巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)为野生大豆高抗材料特有的可操作分类单元(OperationalTaxonomicUnits，OTUs)中的优势种群。【结论】研究结果表明抗感野生大豆根内生细菌的优势种群存在明显差异，而内生细菌的优势种群与大豆孢囊线虫的相互关系正在深入分析研究。关键词：大豆孢囊线虫，野生大豆材料，内生细菌，扩增核糖体DNA限制性分析，分类操作单元中图分类号：X17

5、2文章编号：0001—6209(2014)08—0926—10与植物相关的细菌多种多样，形成一个复杂的成了稳定的互惠共生关系，其在促进宿主植物生微生物群落，依据其定殖生态位点的不同，可分为内长、抵御病原物入侵和有机污染物降解等方面发挥生细菌、根际细菌和附生细菌¨。植物内生细菌着重要作用。许多植物组织的内生细菌种群多(Endophyticbacteria)是一类在其生活史的一定阶样性十分丰富，但其多样性和群落结构常因宿主植段或全部阶段寄居于植物组织内部，但不会使宿主物类型、组织器官和宿主植物生长环境的表现明显

6、病症的微生物类群。有研究指出，一些内不同而有所差异。植物内生细菌被认为是土壤微生生细菌类群在与宿主在长期协同进化的过程中，形物菌群的一部分，特定植物的根系分泌物是促使根基金项目：河北省自然科学基金项目(C2014407021)；中国博士后科学基金(20100480028)；河北科技师范学院博士启动基金(2007YB010)通信作者。Tel／Fax：+86-335-2039623；E-mail：xiaozhu一1688@126．com作者简介：武云鹏(1988一)，男，河北张家口人，硕士研究生，研究方向为大豆

7、孢囊线虫生物防治。E-mail：wuyunpeng_2007@126·com收稿日期：2014-03．19；修回13期：2014-06-18武云鹏等：野生大豆抗感大豆孢囊线虫材料内生细菌多样性分析．／微生物学报(2014)54(8)际土壤细菌变为内生细菌的主要驱动力，植物可服务公司合成，ExTaqDNAPolymerase等扩增所用以直接或间接利用此类细菌控制土传病害的发试剂和pMD18-T载体均购自宝生物(大连)有限公生⋯。因此了解植物内生细菌的多样性及其功能，司，GelExtractionKit购自美国

8、OMEGA公司，内切将有助于内生细菌资源的开发和利用。酶购自加拿大NewEnglandBiolabs公司。PCR仪和大豆孢囊线虫(SCN，Heteroderaglycines凝胶成像分析仪购自美国Bio-Rad公司，人工气候Ichinohe)是世界大豆生产中最为严重的土传性病害箱MGC一350BP-2购自上海一恒科学仪器有限公司。之一，每年给各大豆主产国造成重大的经济损1．1．2供试植物：野生大豆(Clycine