bmi-1基因rna干扰对胃癌sgc-7901细胞增殖和凋亡的影响

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1、·4l0·医学新知杂志2013年第23卷第6期Bmi一1基因RNA干扰对胃癌SGC一7901细胞增殖和凋亡的影响魏伟王智汪玲肖军【摘要】目的构建针对Bmi一1基因的RNAi表达载体，观察其对胃癌细胞SGC一7901增殖和凋亡的影响。方法利用慢病毒表达体系pHelper1．0／pHelper2．0／pGCL—GFP，成功构建针对Bmi一1基因的RNAi重组质粒vshRNA—Bmi一1，适时定量PCR(real—timePCR)检测稳定转染后胃癌细胞SGC一7901中Bmi一1mRNA表达，流式细胞术检测细胞凋亡，MTI"法检测其增殖能力。结果稳定转染vshRNA—Bm

2、i一1后SGC一7901细胞Bmi一1mRNA表达明显下降，总抑制效率达85％；癌细胞增殖减慢，凋亡率明显增加。结论构建针对Bmi一1基因的RNAi表达载体，成功转染胃癌细胞SGC一7901，可促进癌细胞凋亡，抑制其增殖能力。【关键词】Bmi一1；RNAi；胃癌；凋亡；增殖【中图分类号】R446．5【文献标识码】A【文章编号】1004-5511(2013)06~410-04EfectofBmi一1geneRNAionProliferationandApoptosisofGastricC：arcinomaSGC一7901CellWeiWei，WangZhi，WangL

3、ing，eta1．ForthDepartmentofInternalMedicine，DawuPeople§Hospital，Dawu432800，China【Abstract】ObjectiveToconstructBmi一1RNAiexpressionvectorandinvestigateitsinfluenceonproliferationandapoptosisofgastriccarcinomaSGC一7901cells．MethodsRecombinantplasmidvshRNA—Bmi一1wascon—structedbyantiviralexpr

4、essionsystempHelper1．0／pHelper2．0／pGCL—GFP．Bmi一1mRNAexpressioninstablytransfectedgastriccarcinomacellswasidentifiedbyreal—timePCR．CellapoptosiswasdetectedbyflowcytometryandcellproliferationwasdetectedbyMTF．ResultsBmi一1mRNAexpressioninstablytransfeetedSGC一7901cellswassignificantlydecrea

5、sedwithtotalinhibitioneficiencyof85％．Theproliferationofcarcinomacellssloweddownandapoptosisrateincreasedsignificantly．ConclusionSuccessfulconstructionofBmi一1RNAiexpressionvec—torwithtransfectedSGC一7901cellscanpromoteapoptosisofgastriccarcinomacellsandsuppressproliferationofthem．【Keywor

6、ds】Bmi一1；RNAi；Gastriccar℃inoma；Apopt0sis；ProliferationRNA干扰(RNAinterference，RNAi)作为一种简1．1试剂慢病毒表达载体购自上海吉凯基因化学单、有效替代基因敲除工具，目前已被广泛用于肿瘤技术有限公司，该载体由pGCL—GFP、pHelper1．0及等疾病的研究。RNAi载体可持续转录小分子RNApHelper2．0三种质粒组成，其中pGCL—GFP含有能(smallinterferenceRNA，siRNA)，维持长时间基因沉持续表达小RNA的元件，同时能表达绿色荧光蛋白默，为肿瘤基因研究提

7、供良好的平台，尤其是一些过(GFP)；pHelper1．0和pHelper2．0含有病毒包装所表达的癌基因。研究发现，Bmi一1(Bcell—specific必须的元件。脂质体Lipofectamine2000、Trizol购自美MLVintegrationsite一1)基因在胃癌细胞中过表达，且国Invitrogen公司，DMEM购自GIBCO公司。M—MLV在胃癌发生和侵袭转移中扮演着重要角色。因此，逆转录酶、RnaseInhibitor为promega公司产品，噻唑我们利用RNAi慢病毒表达系统pHelper1．0／pHelp-蓝(MTT)为北京鼎国公司产