正交试验优选蒙椴树总黄酮的提取工艺

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1、2010年7月内蒙古大学学报(自然科学版)JuI．20lO第41卷第4期JournalofInnerMongoliaUniversityVolJ41No．4文章编号：1O00—1638(2010)04—0381—03正交试验优选蒙椴树总黄酮的提取工艺李娜，田福利，王瑞亭(1．内蒙古大学化学化工学院，呼和浩特010021；2．大唐多伦煤化工有限责任公司，内蒙古多伦027300)摘要：研究了蒙椴树中总黄酮的最佳提取条件．采用(3)正交表设计方案进行试验，以芦丁为标准品，用紫外一可见分光光度法测定蒙椴树乙醇提取物中的总黄酮含量．结果表明：乙醇浓度对蒙椴树总黄

2、酮的提取影响较大，其他3个因素影响程度排序为：提取时间>提取次数>乙醇用量．1o倍量95乙醇，提取次数2次，每次提取时间3小时为本次实验筛选出的最佳条件．关键词：蒙椴树；总黄酮；正交试验中图分类号：O621．4文献标志码：A蒙椴是椴树科(Tiliaceae)椴树属(TiliaL．)植物，别名小叶椴，是内蒙古地区典型树种，椴树的树皮和根皮用于治疗筋无力、慢性咳嗽、关节炎、风湿等疾病，为民间常用药材．欧美则应用椴树花作发汗剂、镇静剂、解热剂等，多种椴树的花和叶被药典收录用于治疗感冒、发烧等．椴树还有助于防止动脉硬化，心肌梗塞等疾病，将椴树蜜添加在酒中，可调

3、配成减轻疲劳，恢复体力的饮料．目前已开展了其对心血管系统、抗炎、护肝和抗菌抗病毒等作用的研究．椴树中的黄酮苷具有多种生物活性．它有维生素P样作用，能降低血管脆性及异常的通透性，可用于防治高血压及动脉硬化的辅助治疗剂．鉴于黄酮类化合物具有的药理活性，本文对其提取条件进行实验研究．1实验部分1．1仪器uV一120—02型紫外一可见分光光度计(日本岛津)，sHz—C型水循环式多用真空泵．1．2材料蒙椴树皮和树叶均采自内蒙古林业科学研究院植物园，并由张玉凤研究员鉴定树种为TiliaMongolicaMaxim．其他试剂均为分析纯．1．3实验方法1．3．1黄酮的

4、提取方法精密称取冷冻的蒙椴树皮5．0g，按照正交试验表选定的因素和水平用乙醇回流提取．1．3．2提取条件的选择根据黄酮类化合物易溶于乙醇、热稳定性强等特性，选择乙醇为提取溶剂，以总黄酮含量为指标，对乙醇浓度、用量、提取时间、提取次数等四个因素进行考察，每个因素限定三个水平，根据正交表L(3)安排实验．具体内容见表1．*收稿日期：2010—03—10：修回日期：2010—04—09基金项目：国家自然科学基金资助项目(20562006)；内蒙古自然科学基金资助项目(200508010201)作者简介：李娜(1980一)，女(蒙古族)，内蒙古赤峰市人，200

5、6级硕士研究生．通信作者：田福利(1958一)，男，内蒙古集宁市人，教授，硕士．研究方向：有机天然产物．382内蒙古大学学报(自然科学版)表1正交设计因素和水平Table1Factersandlevelsoforthogonaltest123456781l1222331．3．3标准曲线的绘制精密称取芦丁标准品20．0mg置于200mL容量瓶中，加6O％乙醇，溶解至刻度，摇匀即得标准液，精密吸取标准品液0，0．1，0．2，0．3，0．4，0．5mL置于10．OraL容量瓶中，分别加5％亚硝酸钠溶液0．3mL，摇匀放置6分钟，加1O硝酸铝溶液0．3mL摇匀

6、放置6分钟，再加4氢氧化钠溶液4mL，最后用3O的乙醇稀释至刻度，摇匀放置15分钟，以蒸馏水为空白对照，在510nm123l23l2处测定吸光度．以浓度(c)与吸光度(A)进行线形回归，得回归方程为A一0．0125C一0．0008，r一O．99971．3．4蒙椴树中总黄酮含量的测定精密称取5．Og蒙椴树皮共九份，置于圆底烧瓶中，按正交实验进行加热回流，将所得提取物用乙醚萃取，合并滤液，6O乙醇定容到250mL．分别从试液中吸取1．0mL于10mL的容量瓶中，按实验方法测得吸光度值，由回归方程计算蒙椴树皮中总黄酮的含量．123231312结果2．1最佳条

7、件的测定2．1．1直观分析由表2中可以看出，乙醇浓度对总黄酮的含量影响较大，乙醇用量则相对较小，各因素的最优组合确定为A。B。CD即为1O倍量95乙醇，提取次数为2次，每次提取时间为31小时2．3312Z32．1．2方差分析由表3方差分析数据可知乙醇浓度和提取时间对指标均有显著作用，乙醇用量无显著差异，这与直观分析结果基本一致．表2正交实验安排及结果Table2Arrangementsandresultsoforthogonaltest实验号乙醇浓度(A)提取时间(B)提取次数(C)乙醇用量(D)黄酮含量／4．816．265．156．737．437．4

8、44．606．448．622．2重复性试验取3份冻干的蒙椴树皮各10克，按最佳提取条件平行操作