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《检测马铃薯环腐病菌的pcr_elisa和dna杂交等方法的比较》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、国外农学)杂粮作物1998,18(1):49~52检测马铃薯环腐病菌的PCR、ELISA和DNA杂交等方法的比较S.A.Slack等著刘学敏译尽管在种用马铃薯中,对细菌性环腐病马铃薯环腐病菌菌株SS43在7g/100g的不容许残留限制超过了50年,但在北美的蛋白胨和7g/100g的蔗糖溶液中以冻干的洲,该病仍然是马铃薯种薯的主要限制因素。形式保存,于室温下(接近23e)在肉汁-酵由于实施不容许残留限制主要是通过观察大母琼脂培养基上(NBY)培养。生长5d~7d量种用马铃薯,因而检测这种病害时干扰观后,细
2、菌被转移到装有500mlNBY培养液的察者能力的因素如无症状侵染、对症状发展1L烧瓶中,室温下在Labline3520摇床上以不利的环境条件、栽培品种对马铃薯环腐病150r/min的速度振荡培养1周。于4e,以菌(Clavibactermichiganensissubsp.sepe-15000xg离心30min收集菌体,重新悬浮于donicus)反应的变异、以及其它病害的干扰或0105mol/LpH712的磷酸缓冲溶液(PB)中,8寄主直接自然衰老等都影响检测的有效性。根据A600相当于110@10CF
3、U/ml调整悬浮只基于症状表现来诊断细菌性环腐病的困难411液浓度为10CFU/ml或10CFU/ml。使得几种检测方法得到运用和发展,其中包1.2试验设计和准备括革兰氏染色,茄子生物检测和几种血清试接种剂量和栽培品种(3@2)因子处理采验,如胶乳凝集作用,免疫荧光,酶联免疫吸用完全随机区组设计,由6个小区(每小区附测定(ELISA)。虽然已经证实这些方法是15株)组成,试验在北达克他州法戈和纽约有用的,但它们的使用受劳动力、空间、灵敏州伊萨卡进行。种薯准备和接种在伊萨卡进度或特异性以及检测所需时间等因
4、素的限行,种薯在法戈种植,隔夜邮递。经过检验的制。马铃薯种薯(品种BelRus和RussetBur-最近,DNA杂交测定(DHAs)法在检测bank)切割前1周从冷藏中取出,切下含有单和诊断细菌性环腐病中显示出了魅力。这种个芽眼同样大小的种薯(约40g)保存于纸袋方法对于马铃薯环腐病菌的检测是高度特异中,纸袋用3g/LPenncozeb溶液浸湿并酸化的,但其检测灵敏度是个限制因素。克服这2d~3d。在种块发芽的一侧以15b角插入移个问题的方法是利用聚合酶链反应(PCR)。液管尖端,用10Ll细菌悬浮液接
5、种,最终接本研究详述了利用PCR检测和诊断田间生29种剂量为10或10CFU,对照植株用10Ll长马铃薯粗提取液中细菌性环腐病的调查结无菌PB接种。接种后,将种子送回前面所果,并提供了PCR同ELISA和DHA的比较述的纸袋中,于室温下贮存直至种植。数据,这个数据的报告已发表。1.3样品准备和试验1材料和方法定植后35d和90d,在每个小区选取5株地上或土中的主茎样本,在北达克他收集1.1细菌培养和接种体的准备的样本通过特快邮递送至纽约,样品用冷自收稿日期:1997-04-02摘译自:PlantDise
6、ase5植物病害61996,80(5):519~524校者:赵廷昌#50#国外农学)杂粮作物第18卷来水冲洗,按先前描述的方法直接用尼龙膜溴化乙锭染色,在紫外灯下观察。吸印,然后样品密封于塑料袋中,保存在1.5数据分析-135e下。至少24h后把样品从冷冻中取测定结果以二进制变量输入计算机并用出,缓缓融化,再在尼龙膜上吸印,尼龙膜按逻辑算符(如和,如果,或)进行比较,根据制前面描述的方法进行杂交,然后,从样品上切造者的推荐,A405=012的吸收值作为下一小块(110g)放入2mlTE溶液(10mmol
7、/ELISA样品的界限值,记为阳性。PCR和LTris-HCl,110mmol/LEDTA,pH810)中研DHA样品分别以在凝胶上存在相应大小的磨,准备进行ELISA和PCR试验。这些提谱带或放射性自显影上产生明显的标志记为取液放在微形试管中于-80e下保存。用于阳性。所有样品的分析结果用Cochran测验ELISA检测的样品,先将100mlTE提取液进行比较。接种剂量、品种、地点和取样日期加入900ml提取缓冲溶液中[014g/100g牛对每种方法检测性能的影响利用SAS系统血清白蛋白(BSA),2
8、g/100g聚乙烯基吡咯中的PROCGLM程序分析协方差确定,除烷酮mol/Lr24000~40000,0113g/非另有记录,本文数据为所有样品的最终测100gNa2HPO4,0102g/100gKH2PO4,0102g/验结果。100gKCl,0105g/100g吐温20,pH714]根据2结果和讨论制造者提供的方案进行检测。用于本研究的ELISA系统是以DeBoen等(1989和1988)我们的PCR反应程序中使用了一个20-描述的马
