应用荧光染色法检测寄主昆虫体表病原真菌孢子及其附着孢

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1、微生物学杂志2010年5月第30卷第3期JOURNALOFMICROBIOLOGYMay2010Vo1．30No．391应用荧光染色法检测寄主昆虫体表病原真菌孢子及其附着孢曹月青，朱祥先(重庆大学生物工程学院基因工程中心重庆市杀虫真菌生物农药工程中心，重庆400044)摘要采用蝗虫翅膀作为侵染组织，探讨了荧光染色剂CaleofluorWhiteM2R在观测寄主体表绿僵菌孢子及其附着孢形成中的应用。结果表明，在荧光显微镜下，清晰可见蝗虫翅膀上发蓝色荧光的绿僵茵孢子、芽管及附着孢，而蝗虫翅膀未被染色，避免了干扰观察目标物。该方法可以准确观察病原真菌孢子在昆虫体表组织的萌发及附着孢形成。关键词

2、昆虫病原真菌；绿僵菌；附着孢；CaleofluorWhiteM2R；荧光染色中图分类号$476’．12文献标识码B文章编号1005—7021(2010)03—0091—02TestandDeterminationofEntomopathogenicFungalSporeandAppressoriumonItsHostwithCalcofluorWhiteM2RCAOYue—qing，ZHUXiang·xian(GeneticEngin．Res．Cent．，Inst．ofBioengin．，ChongqingUni．；ChongqingEngin．Res．Cent．forFungalIns

3、ecticides，Chongqing，400044)AbstractLocustwingswereusedasinfectiontissuesinthisstudy，toinvestigatetheapplicationoffluorescentstainCalcofluorWhiteM2RforobservationofMeturhiziumanisopliaesporesandtheformationofitsappressorium．There—suitsshowedthatunderfluorescencemicroscopybluefluorescencecouldbesee

4、nclearly，showingthedetailedshapesandcharacteristicsofspores，germtubes，andappressoriumofMetarhiziumanisopliaeonthewing’ssuEfaceoflocust(Migratoriamanilensis)．Sincethelocustwingitselfwasnotstainedanditbecamedarkbackgroundunderfluores—cencemicroscopy，whicheliminatedpossiblebackgroundthatinterferingt

5、heobservationoftheobject．Thismethodcouldbeaccuratelyusedfortheobservationofthegerminationofpathogenicfungalsporesandtheformationofappres·soriumofentomopathogeniefungiontheirsurfaceofthehostinsects．Keywordsentom0pathogenicfungi；Metarhiziumanisopliae；appressorium；CalcofluorWhiteM2R；fluorescentstain

6、ing附着孢是昆虫病原真菌重要的侵染结构。通多色素，背景很高，用普通光学显微镜观察病原真常采用封口膜或塑料培养皿作为孢子附着物，检菌萌发及附着孢，会因背景杂乱而难于分辨，而电测孢子萌发及附着孢形成情况¨，但这些材料镜观察又因制样过程比较繁琐且成本较高，不适的化学成分和结构与昆虫体表存在很大差异，不用于普遍采用。荧光染色剂CalcofluorWhite能真实反应病原真菌孢子在昆虫体表附着萌发和M2R(CFW)能与真菌胞壁的纤维素、几丁质和其产附着孢情况。同时，由于昆虫体壁通常含有较他B一1，4糖苷键碳水化合物紧密结合，可吸收、基金项目：国家自然科学基金(30800736)；教育部博士点新教

7、师基金(20070611043)；重庆大学“211工程”三期建设研究生开放实验室项目(S-09014)作者简介：曹月青女，副研究员。主要从事昆虫病原真菌致病机制研究。Tel：023-65127293，E—mail：yueqingcao@cqu．edu．cn收稿日期：2009—10—27；修回日期：2010-01-06微生物学杂志30卷紫外光，使菌丝发出明亮的淡兰色荧光，在荧光显观察，且其构成与蝗虫体壁成分一致，因此可以认微镜下真菌轮