缬氨酸转氨酶固定化细胞的制备.pdf

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1、中国。调味品第39卷第8期ChinaCondiment基础研究2014年8月缬氨酸转氨酶固定化细胞的制备张飞，刘寅，魏涛，杨雪鹏，钟桂芳(郑州轻工业学院食品与生物工程学院，郑州450002)摘要：考察了海藻酸钠法制备缬氨酸转氨酶固定化细胞的制备条件，以及该固定化细胞的操作稳定性。正交试验结果显示：固定化细胞制备条件为海藻酸钠浓度30g／L、交联剂戊二醛浓度1．5％(v／v)、茵体负载量4Og／L、固定化时间4h。该固定化细胞连续使用1O次，底物平均转化率为15．48，显示了较好的稳定性。关键词：缬氨酸转氨酶；海藻酸钠；固定化细胞中图分类号：TS201：25文献标志码

2、：Adoi：10．3969／j．issn．1000-9973．2014．08．002文章编号：1000-9973(2014)08-0009-03PreparationoflmmobilizedCellswithValine—PyruvateTransaminaseActivityZHANGFei，LIUYin，WEITao，YANGXue-peng，ZHONGGui—fang(SchoolofFoodandBioengineering，ZhengzhouUniversityofLightIndustry，Zhengzhou450002，China)Abstract：

3、Thepreparationconditionsofimmobilizedcellswithvaline-pyruvatetransaminaseactivityarestudied．Theoptimaltemperature．pHandoperationalstabilityofimmobilizedcellsarealsoinves—tigated．Theresultsshowthattheoptima1conditionsforpreparationofimmobilizedcellsaresodiumalginateof30g／L，glutaraldehyd

4、eof1．5(v／v)，cellsloadedconcentrationof40g／L，cellsimmo-bilizationtimeof4h．Theimmobilizedcellsarecontinuouslyusedfor10timesandtheaveragecon—versionrateis15．48，whichshowsbetterstability．Keywords：valine-pyruvatetransaminase；sodiumalginate；immobilizedcellsI)-氨基酸常具有L-氨基酸不具有的某些特殊功代丁酸和L一丙氨酸反应生

5、成L一缬氨酸与丙酮酸，能。随着研究的深入，越来越多I)-氨基酸的作用被发也可以催化该反应的逆反应。理论上，利用该酶现，I)_氨基酸和非天然氨基酸的生产已成为氨基酸行可以把丙氨酸外消旋混合物中的L一丙氨酸转化为业新的发展方向[1]。I)-氨基酸在食品添加剂领域具有丙酮酸，从而实现DL-丙氨酸的拆分。本实验室重要的应用价值。肽类甜味剂是一类具有很高商业价构建了一株产缬氨酸转氨酶的大肠杆菌工程菌，值的食品添加剂，由某些I)-氨基酸参与合成的小肽甜并对其催化活性进行初步分析Is,4]。本文以海藻度非常高[2]。目前，市售的高效甜味剂阿力甜(alit—酸钠为固定化载体，对上述

6、工程菌进行固定化，考ame)是由【)-A1a与L-Asp为主要原料合成的二肽，甜察了海藻酸钠浓度、交联剂戊二醛浓度、菌体包埋度为蔗糖的2000倍，且耐热、耐酸、耐碱，广泛适用于浓度、固定化时间等因素对固定化细胞酶活的影食品工业。响。实验结果为进一步利用该固定化酶制备I)-氨大肠杆菌缬氨酸转氨酶可以催化3一甲基-2-氧基酸提供理论依据。收稿日期：2O14一O2—1O*通讯作者基金项目：郑州轻工业学院博士基金资助项目(2010BSJJ020)作者简介：张飞(1976一)，男。讲师，博士，研究方向：生物催化；杨学鹏(1973一)，男，副教授，研究方向：生物催化。一9一中国

7、调味昌第39卷第8期ChInaCondiment基础研究2014年8月1材料与方法1．1试剂和仪器海藻酸钠、蛋白胨、酵母浸膏国药集团化学试剂有限公司；异丙基一f}_I)-硫代半乳糖苷(IPTG)生工生物工程(上海)股份有限公司；戊二醛(25)天津市津宇精细化工厂；DL-丙氨酸(分析纯)湖北新生源生物工程股份有限公司；3一甲基-2-氧代丁酸钙盐(分析纯)上海酶联生物科技有限公司；其它试剂均为分析纯。LB液体培养基(1L体系)：蛋白胨10g，酵母提lU20阳40oU取物5g，氯化钠5g，定容前用NaOH调节pH至7．0，海蕞馥钠浓度(g／L)120℃高压灭菌备用。圈