绿盲蝽乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立-论文.pdf

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1、河南农业科学，2014，43(2)：88—91JournalofHenanAgriculturalSciences绿盲蝽乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立李国平，周晓静。，封洪强，田彩红，邱峰(1．河南省农业科学院植物保护研究所，河南郑州450002；2．河南农业大学植物保护学院，河南郑州450002)摘要：为明确绿盲蝽[Apolyguslucorum(Meyer-Diir)]乙酰胆碱酯酶(ACHE)活性测定的最佳反应条件，采用正交试验研究了酶浓度、底物浓度、反应时间、反应温度、反应体系pH值5个因素对绿

2、盲蝽三龄若虫AChE活性测定的影响。通过极差分析和方差分析发现，各因素对AChE活性测定影响的大小顺序为：反应时间>酶浓度>底物浓度>pH值>反应温度。绿盲蝽若虫AChE活性测定的最适反应条件为：酶浓度6头／mL、底物浓度6mmol／L、反应时间5rain、反应温度35℃、pH值8．0。关键词：绿盲蝽；乙酰胆碱酯酶；正交试验；活性测定；反应体系中图分类号：$433．3文献标志码：A文章编号：1004—3268(2014)02—0088—04EstablishmentofOptimalReactionS

3、ystemforAssayingAcetycholinesteraseActivityofApolyguslucorum(Meyer-Diir)LIGuo—ping，ZHOUXiao-jing。，FENGHong—qiang，TIANCai—hong，QIUFeng(1．InstituteofPlantProtection，HenanAcademyofAgriculturalSciences，Zhengzhou450002，China；2．CollegeofPlantProtection，HenanA

4、griculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)Abstract：InordertOclarifytheoptimaloonditionsforassayingtheactivityOfacety1cho1inesterase(AChE)fromApolyguslucorum(Meyer—Dar)，theconcentrationsofAChEandsubstrate，reac—tiontime。temperatureandpHofreactionsystemw

5、eredeterminedbyorthogona1experiment．L25(5)orthogonalmatrixwasadopted，withoutconsideringinteraction．Throughanalyzingthedatafromorthogonalexperimentwithrangeanalysisandvarianceanalysis，theeffectsontheactivityofAChEwereintheorderoftime>concentration0fAChE>

6、concentrationofsubstrate>PH>temperature，anditwasfoundthattheoptimalconditionsfordeterminingAChEactivitywereasenzymeconcentrationof6larvae／mL。substrateconcentrationof6mmol／L，reactiontimeof5min．reactiontemperatureof35℃，andPH8．0．Keywords：Apolyguslucorum(Me

7、yer-Dt~r)；acetylcholinesterase；orthogonalexperiment；activ—itydetermination；reactionsystem绿盲蝽[Apolyguslucorum(Meyer—Dar)]属半(AChE)活性部位磷酰化或氨基甲酰化而抑制AChE翅目(Hemiptera)盲蝽科(Miridae)，是我国棉花上的活性，使乙酰胆碱在突触间的作用时间延长，从而的重要害虫，在棉花各个生长时期均可造成严重危引起突触后膜乙酰胆碱受体的超兴奋，破坏正常的神害口]。近

8、年来，随着转＆基因抗虫棉大面积种植，棉经冲动传导，引起一系列的中毒症状_g。，直至死亡。铃虫得到了有效控制，化学农药的施用频率降低，使AChE敏感度降低是昆虫对有机磷和氨基甲酸酯类得原来的次要害虫绿盲蝽上升为棉田主要害虫[2]。杀虫剂产生抗性的重要机制之一【1。有研究报道，目前，对绿盲蝽的防治仍以施用化学杀虫剂为主，特豆荚草盲蝽(LygushesperusKnight)对有机磷杀虫剂别是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂L7_8]，这2类农药产生抗性的主要原因是