重组人白介素1受体拮抗剂（rhIL-1Ra）重复给药导致大鼠和食蟹猴产生结合抗体-论文.pdf

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1、第32卷第4期上海交通大学学报(农业科学版)VoL32No．42014年8月JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(AGRICULTURALSCIENCE)Aug．2014文章编号：1671—9964(2014)04—0014—05DOI：10．3969／J．ISSN．1671—9964．2014．04．003重组人白介素1受体拮抗剂(rhlL一1Ra)重复给药导致大鼠和食蟹猴产生结合抗体杨敏敏，陆海波。，韩伟，郜尽(1．上海交通大学药学院，上海200240；2．交晨生物医药技术(上海)有限公司，上海201203)摘要：限制大分

2、子药物使用的关键因素之一为诱导抗体产生。新药安全性评价时往往不得不采用多种动物评价人源蛋白的安全性，因此，测定动物产生抗体水平是正确评价大分子药物的前提。为了检验重组人白介素1受体拮抗剂(rhlL-1Ra)在动物体内的安全性，采用间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定rhlL-1Ra结合抗体，以纯化抗原作为包被载体，加入供试品后再加酶标抗体，用底物显色并在酶标仪上读取结果。结果显示，抗原包被浓度为10tag／mL、酶标二抗工作浓度为l：5000、阳性对照工作浓度为1：10000、待检血清样品稀释度从1：100开始较为合适。SD大鼠肌肉注射给予rhIL-1Ra

3、4周试验中，剂量分别为0、5、15和30mg／kg。结果表明，剂量≥5mg／kg时给药2周后可诱导产生结合抗体。食蟹猴每天1次连续给药4周，剂量分别采用0、2．5、7．5和15．0mg／kg，当剂量≥2．5mg／kg时可诱导产生结合抗体。关键词：重组人白介素1受体拮抗剂；结合抗体；酶联免疫吸附测定法中图分类号：R322．7；Q255文献标识码：AAnti—rhlL一1RaBindingAntibodyDetectioninRatsandCynomolgusMonkeysPostRepeatedrhlL一1RaInjectionyANGMin—min，LUHai

4、—bo。，HANWei，GAOJin(1．SchoolofPharmacy，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China；2．GeneralRegeneratives(Shanghai)Co．Ltd．，Shanghai201203，China)Abstract：Anti—rhIL-1Rabindingantibodiesinserumweretestedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)．Theoperationoftheassayincludedpureantig

5、encoating，sampleaddition，enzymelabeledantibodyadditionandquantifyingtheabsorbanceofsubstrateinamicroplatereader．Theresultsshowedthatthekeyindexesofthedevelopedmethodwereasfollows：theconcentrationofthecoatedantigenwas10／~g／mL，thetiterofenzyme—labeledantibodywas1：5000，theworkconcentra

6、tionofthepositivecontro1serumwas1：10000，andthedilutionoftestserumbeganfrom1：100．SDratswereadministratedwithrhIL-1Rabyimatdosesof0，5，15and3Omg／kgforfourweeks．Theresultsofanimalexperimentshowedthatdoses≥5mg／kgaftertwoweeksofrhIL-1RaadministrationinducedrhIL-1Rabindingantibodies．Meanwh

7、ile，thesimilartestonCynomolgusmonkeysatdosesof0，2．5，7．5and15．0mg／kgindicatedthat收稿日期：2013—10—16基金项目：上海市科委重点科技攻关项目(11431921300)作者简介：杨敏敏(1984一)，女，本科，研究方向：生物技术药物质量检测和控制，E-mail：ymm0418@126．corn；韩伟(1962一)为本文通讯作者，男，博士，教授，研究方向：再生药学，E-mail：weihan@sjtu．edu．cn；郜尽(1977一)为本文并列通讯作者，男，博士，助理研究员，研究

8、方向：生化与微生物药学，E-mail：