犬血清总补体(ch50)酶联免疫分析

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1、犬血清总补体（CH50）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的犬CH50，且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定犬血清、血浆或其它相关生物液体中CH50含量。说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。实验原理用纯化的抗体包被微孔板

2、，制成固相载体，往包被抗CH50抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗CH50抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CH50呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assayplate）：一块（96孔）。2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。3.样品稀释液（SampleDiluent）：1×20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-anti

3、bodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120ul/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120ul/瓶（1：100）8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。9.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的

4、试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000xg离心

5、20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100U/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释100U/ml，50

6、U/ml，25U/ml，12.5U/ml，6.25U/ml，3.12U/ml，1.56U/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0U/ml，临用前15分钟内配制。如配制50U/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）100U/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。生物素标记抗体的稀释原则：临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul生物素标记抗体加990ul生物素标记抗体稀释液的比例

7、配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根过氧化物酶标记亲和素加990ul辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样：分别设空白

8、孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖