GFP＋Luc双报告基因标记脂肪干细胞裸鼠体内示踪研究.pdf

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1、·1147·论著基础研究GFP+Luc双报告基因标记脂肪干细胞裸鼠体内示踪研究戴淼。，吴氢凯。，许培荣。，候晏。，冯洁。1．苏州大学医学院研究生部，苏州215123；2．上海交通大学附属第六人民医院妇产科，上海200233[摘要]目的探索慢病毒载体GFP+Lue双报告基因标记和生物发光成像技术活体内示踪脂肪干细胞的可行性。方法利用慢病毒载体将绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)双基因标记脂肪干细胞，利用荧光显微镜观察人脂肪干细胞(ADSCs)体外转染率，裸鼠皮下注射脂肪干细胞后1h，1⋯246

2、和8周利用生物发光成像系统连续监测ADSCs在裸鼠活体内的发光强度。离体组织DAPI染色鉴定移植细胞的存在及其存在的组织层次。结果荧光显微镜下观察慢病毒感染后的人ADSCs的GFP表达率高，流式细胞术测定转染率为87．3％，传至25代的人ADSCs仍稳定表达GFP。慢病毒载体对人ADSCs的生长和增殖没有影响。裸鼠注射ADSCs后活体内生物发光时间可持续8周，ADSCs主要分布在移植部位。离体组织切片鉴定标记的脂肪干细胞存在于移植部位皮下。结论慢病毒介导GFP十Luc双报告基因标记和生物发光技术可用

3、于监测脂肪干细胞在动物体内的生物行为。[关键词】绿色荧光蛋白；荧光素酶；脂肪干细胞；生物发光成像技术[DOI]10．3969／j．issn．1674—8115．2014．08．008[中图分类号]Q254[文献标志码]AInvivotrackingofadipose—derivedstemcellslabeledwithgreenfluorescentproteinandluciferasedualreportergeneDAIMiao一，WUQing-kai，XUPei．rong，HOUMin，F

4、ENGJiej．DepartmentofGraduate，SchoolofMedicine，SoochowUniversity，Suzhou215123，China；2．DepartmentofObstetricsandGynaecology，theSixthPeople'sHospital，ShanghaiJiaoTongUniversity，Shanghai200233，China【Abstract】ObjectiveT0explorethefeasibilityof／nvivotracking

5、ofadipose—derivedstemceils(ADSCs)byusinglentiviralvectorscontaininggreenfluorescentprotein(GFP)andluciferase(Luc)dualreportergenetransfectionandbioluminescentimagingtechniques．MethodsTheADSCswereisolatedfromhumanadiposetissuesamplesofcosmeticsubdermall

6、iposuction．TheADSCsweretransfectedbylentiv~a1vectorscontainingGFPandLuc．Thelabelingemciencywasevaluatedbyfluorescencemicroscopeandfloweytometryinvitro．ThetransfectedADSCsweresubcutaneouslyiniectedintoBALB／Cmice，andthenanon．invasivebioluminescenceimagin

7、gprocedurewasperformed1h，l，2，4，6and8weeksaftertransplantation．TheDAPIstainingofskindssueswasperformedtoidendfythesnrviva1andthelocationoftransplantedADSCs．ResultsHi甜lGFPexpressionwasobservedintransfectedADSCsbylendvira1vectorunderfluorescencemicroscope

8、．ThePansfecdoneficiencyof1endviralvectorscontainingGFPandLucwas87．3％．TransfectedADSCscanexpressGFPandLucafter25successivegenerations．and山e~ansductionofADSCswithlentiviralbioluminescencereportervectorshadnoeffectoncelproliferation．Thebio