大鼠急性酒精性肝损伤肝细胞凋亡及其发病机制研究-论文.pdf

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1、1502GuangxiMedicaJournaZ，Nov．2013，Vo1．35，No．11大鼠急性酒精性肝损伤肝细胞凋亡及其发病机制研究丁宁程勇前卿松王建军闫涛潘静靳雪源赵平(中国人民解放军三。二医院国际肝病科，北京市100039，E-mail：983441262@qq．corn)【摘要】目的探讨急性酒精性肝损伤与肝细胞凋亡的关系，并对其发病机制进行初步探讨。方法将60只大鼠随机分两组，实验组30只按体重l5g／kg给予浓度为47．5％的酒精一次性灌胃。对照组30只按体重15g／kg给予生理盐水一次

2、性灌胃。灌胃后48h取肝组织，观察两组大鼠的肝脏大体形态并检测ALT、AST、肿瘤坏死因子一n(TNF-n)及丙二醛(MDA)等指标。结果实验组大鼠肝组织呈现片状坏死，且ALT、AST、TNF—Q及MDA均显著高于对照组(P均<0．05)。结论急性酒精性肝损伤时可发生肝细胞凋亡，可能与ALT、AST、TNF—Ct及MDA等因子有关。【关键词】肝损伤；肝细胞凋亡；酒精；大鼠【中图分类号】R575．4【文献标识码】A【文章编号】0253—4304(2013)11—1502—03DoI：10．11675／j

3、．issn．0253—4304．2013．11．24目前，酒精滥用与酒精依赖已经成为世界日益严离心，分离血清分装，一70％冰箱储存。将肝脏取出，重的公共卫生问题。酒精性肝病(alcoholicliverdis—立刻置于10％甲醛溶液标本瓶里固定。ease，ALD)是由于长期大量饮酒导致的疾病，初期通1．2TUNEL法检测凋亡取大鼠右叶肝组织，10％常表现为脂肪肝，进而发展为酒精性肝炎、酒精性肝中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，用于纤维化及肝硬化，严重酗酒时可诱发广泛肝细胞坏死观察肝脏的病理变

4、化。取大鼠肝组织固定，蜡块切片甚至肝衰竭-2]。ALD是西方国家人群肝硬化的最用TUNEL试剂盒检测。试剂盒为罗氏公司生产，按主要致病因素，近年来ALD在我国亦呈明显增加趋使用说明进行检测。正常肝细胞核呈现蓝绿色，凋亡势，严重危害人民健康J。近年来发现细胞凋亡在肝细胞核呈现棕褐色。镜下计数5个高倍视野中阳ALD发展过程中有着极为重要的作用，乙醇在代谢性凋亡细胞核占该视野细胞核总数的比例，取其平过程中会对细胞内物质产生氧化损伤，如攻击不饱和均数。脂肪酸从而启动脂质过氧化反应，其终产物为丙二醛1．3ALT

5、、AST、TNF一0、MDA的检测全自动生化仪检测血清中ALT、AST的值，TNF—Q用ELISA法检测。(malondiMdehyde，MDA)等，并且MDA等可促进肝脏释放细胞因子，进一步介导一系列的肝损伤‘。j。肿MDA根据试剂盒说明书(南京建成生物有限公司)进行试验，按下列公式计算MDA含量(nmol／m1)：(测瘤坏死因子．n(TNF—Q)在ALD的发病过程中也起重定管OD．测定空白管OD)／(标准管OD一标准空白管要作用卜。本研究通过建立大鼠急性酒精性肝损OD)×标准品浓度(10nmol／

6、m1)×样本稀释倍数。伤模型，对有关的细胞凋亡及相关因子进行探讨。1．4统计学分析采用SPSS10．0统计软件包，计1材料与方法量资料用(4-s)表示，组间比较采用t检验，以P<0．05为有统计学意义。1．1动物的分组及建模健康雄性Wistar大鼠，3～4周龄，由四川大学实验动物中心提供，体重115～2结果140g。利用随机数字表法将60只大鼠分成两组各2．1肝脏病理变化及肝细胞损伤对照组大鼠肝脏3O只。实验组按体重l5kg给予47．5％的酒精一边缘锐利，表面光滑，颜色红润；实验组大鼠肝脏外观次性灌胃

7、。对照组按体重15g／kg给予生理盐水一呈现肿大，色泽较暗，边缘厚钝，见图1。次性灌胃，灌胃后48h处死大鼠。每只鼠按3ml／kg腹腔注射10％水合氯醛麻醉，剖开胸腹部，暴露心脏，剪开心包，用5IIll注射器从心尖部取血，静置后1504GuangxiMedicaZJournal，Nov．2013，Vo1．35，No．112007，10(1)：1—3．[J]．吉林大学学报(医学版)，2006，32(4)：733—736．[4]鲁国兴．还原型谷胱甘肽治疗酒精性肝病35例的疗效[10]CrawfordJM．

8、Histologicfindingsinalcoholicliverdisease观察[J]．广西医学，2008，30(1)：99—100．[J]．ClinLiverDis，2012，16(4)：699—716．[5]HalstedCH，VillanuevaJA，DevlinAM．Folatedefciency，[11]WerlingK．Roleofautophagyinthepathogenesisoflivermethioninemetabolism