复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝组织环氧合酶-2表达影响的实验研究-论文.pdf

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1、中国中医药科技2013年9月第20卷第5期Sep．2013Vo1．20No．5·463·复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝组织环氧合酶一2表达影响的实验研究木卜煜锋陈芝芸严茂祥孟爱红(‘浙江省皮肤病防治研究所·德清313200浙江省中医院消化研究室·杭州310006)摘要目的：观察复方鳖甲软肝片对肝纤维大鼠肝组织环氧合酶一2(COX一2)表达的影响，探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：采用40％的CC1皮下注射6周建立大鼠肝纤维化模型，同时以1g／kg·d的复方鳖甲软肝片灌胃干预6周，原位杂交检浸·l肝组织COX一2mRNA表达，免疫组化检测肝组织oL—sMA、COX一2蛋

2、白表达，放免法检测肝组织匀浆血栓烷B2(TXB2)和6一酮一前列腺素F1(6一Keto—PGF)含量。结果：模型组大鼠肝组织一SMA蛋白、COX一2mRNA和蛋白表达均较正常组明显增强，肝组织TXB2含量及TXB2／6一Keto—PGF】比值也较正常组显著增高，COX一2与仅一SMA表达呈明显正相关；应用复方鳖甲软肝片干预后，大鼠仅一SMA蛋白、COX一2mRNA和蛋白表达均明显减少，肝组织TXB2含量及TXB2／6一Keto—PGF1。比值显著下降。结论：COX一2参与CC14诱导肝纤维化的发病，复方鳖甲软肝片下调肝纤维化大鼠肝组织COX一2表达可是其抗肝纤维化的作

3、用机制之一。主题词肝硬化／中医药疗法复方鳖甲软肝片／治疗应用环氧合酶一2大鼠近年来研究发现，环氧合酶一2(clooxygenase一2，COX一鳖甲软肝片组以橄榄油配制的40％CC1皮下注射，3ml／kg2)在慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化甚至肝癌等的发生、发展中·d一，2IX／w，首剂加倍，连续6周，正常组用等容量的橄榄起着重要的作用。COX一2介导的炎症反应参与肝星状细油代替；同时复方鳖甲软肝片组灌服lg／kg·d。复方鳖甲软胞(hepaticstelatecell，HSC)的活化过程和并影响肝窦微循肝片，正常组、模型组每天灌服等容量的蒸馏水，均6周。所环，通过多条途

4、径参与肝纤维化的发生、发展llJ。复方鳖甲有大鼠自由饮水、标准饲料喂养。末次给药次日空腹麻醉处软肝片是目前临床上用于治疗肝病的中药制剂，笔者前死，取部分肝组织4％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，免疫组期研究发现，复方鳖甲软肝片能显著改善CC1肝纤维化大化观察。部分肝组织加一定比例无水乙醇研磨后以0．9％鼠肝组织炎症程度和纤维化程度，并通过抑制肾素血管紧张氯化钠制成匀浆，4~C离心取上清液，用于检测血栓烷B素系统发挥作用-53。为进一步探讨复方鳖甲软肝片多靶(TXB2)和6一酮一前列腺素F1仅(6一Keto—PGF，。)。点、多途径抗肝纤维化的作用机制，本文在前期研究基础上

5、1．4观察指标检测肝组织COX一2mRNA表达采用原位观察其对肝纤维化大鼠肝组织COX一2表达的影响，报告如杂交法检测；肝组织一SMA、COX一2蛋白表达采用免疫组下。化法检测；肝组织匀浆TXB、6一Keto—PGF。采用放射免疫1材料与方法法检测；均按试剂盒说明书操作。1．1实验动物SD大鼠30只，雄性，SPF级，体重190～原位杂交和免疫组化结果评定标准：COX一2mRNA阳210g，上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物合格证号：性染色主要表现为细胞浆着色，COX一2蛋白阳性染色主要SCXK(沪)2003—0003。表现为细胞浆和／或细胞膜呈现棕黄色着色。d—SM

6、A阳性1．2主要药物及试剂复方鳖甲软肝片：内蒙古福瑞中蒙表达主要表现为细胞浆呈棕黄色，少数膜表达。根据着色程药科技股份有限公司产品，批号：20051208。CCI：上海凌峰度及着色细胞阳性范围进行计算。阳性强度：不着色者为0化学试剂有限公司产品；兔抗COX一2多克隆抗体：美国No-分，着色淡者为1分，中等着色为2分，着色深者为3分；着emarkers公司产品；COX一2mRNA原位杂交试剂盒、鼠抗d色细胞阳性范围：无着色为0分，着色阳性细胞小于1／3为1一平滑肌肌动蛋白(0L—smoothmuscleactin，—SMA)单克分，着色阳性细胞1／3～1／2为2分，着色

7、阳性细胞>1／2为隆抗体：武汉博士德生物技术有限公司；血栓烷B、6一酮一3分。将每张切片着色程度与着色细胞阳性范围得分各自前列腺素F。Ot放射免疫试剂盒：北京普尔伟业生物科技有限相加为其最后计分。公司产品；EnVision免疫组化试剂盒：美国DAKO公司。1．5统计学分析采用SPSS统计软件包统计，数据采用(1．3动物造模及分组处理3O只大鼠随机分3组，即正常±)进行描述，采用方差分析处理。组、模型组和复方鳖甲软肝片组，每组l0只。模型组、复方2结果浙江省中医药重点研究项目计划No．20067~0602．1各组大鼠肝组织COX一2mRNA及蛋白、d—