抗东方马脑炎病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定.pdf

《抗东方马脑炎病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第33卷第11期中国预防兽医学报VO1．33．NO．1l2011年11月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineNOV．201ldoi：10．3969j．issn．1008—0589．2011．11．15抗东方马脑炎病毒结构蛋白E2单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定赵晶，孙恩成，刘霓红，杨涛，杨银辉，耿宏伟，秦永丽，王凌凤，徐青元，吴东来(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001；2．军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物／生物安全

2、国家重点实验室，北京100071)摘要：为制备抗东方马脑炎病毒(EEEV)结构蛋白E2的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位，本研究以Bac．to—Bac真核表达系统表达EEEVE2蛋白，纯化后作为免疫原免疫BALB／c小鼠，取其脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行融合。以原核表达载体pET．30a表达并纯化的EEEVE2蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞，获得4株稳定分泌抗EEEVE2蛋白MAbs的杂交瘤细胞株，分别命名为6F3、6F11、7C11、8B11。Westemblot与间接免疫荧光试验结果表明，获得的4株MAbs均与EEEV呈

3、阳性反应，而与西方马脑炎病毒、乙型脑炎病毒以及登革热病毒1型～4型呈阴性反应。利用部分重叠的原核表达的短肽对E2蛋白抗原表位进行鉴定，初步确定MAb6F11、7C11和8B11识别的抗原表位均为E．33(EGLEYTwGNHPPtvw”)，而MAb6F3无短肽与其反应，推测可能为构象表位。本研究结果为建立EEEV型特异性检测方法、研究E2蛋白结构功能及该病的进一步防制奠定了基础。关键词：东方马脑炎病毒；E2蛋白；原核表达；真核表达；单克隆抗体；抗原表位中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(20l1)11-0893．05Prepar

4、ationofmonoclonalantibodiesagainsteasternequineencephalitisvirusE2proteinandtheB—cellepitopesidentificationZHAOJing，SUNEn—cheng，LIUNi—hong，YANGTao，YANGYin—hui，GENGHong-wei，QINYong—li，WANGLing-feng，XUQing—yuan，WUDong—lai(1．KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealthofMinistryofAgriculture，S

5、tateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnologyHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．InstituteofMicrobiologyandEpidemiology，AcademyofMilitaryMedicalSciences，Beijing100071，China)Abstract：Forpreparationofmonoclonalantibodies(MAb)againste

6、asternequineencephalitisvirus(EEEV)structuralglycoproteinE2andidentificationoftheB—cellepitopes，BALB／cmicewereimmunizedwithproteinE2expressedinBac—to—Baceukaryoticexpressionsystem．SplenocytesoftheBALB／cmicewerefusedwithmyelomacellSP2／0forproducinghybridoma．Fourhybridomasstablysecreti

7、ngMAbsagainsttheproteinE2weredeveloped，designated6F3，6F11，7C11and8B11，anddeterminedbyindirectELISA，coatingwithpurifiedEEEVE2expressedinE．coli．ThewesternblotandIFAdemonstratedthattheMAbswereabletoreactpositivelywithEEEV，whereasnocrossreactionwasfoundforwestemequineencephalitisvirus，Ja

8、paneseenceph