抗狂犬病毒单克隆抗体的研制及应用.pdf

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1、中国动物传染病学报2010，I8(5)：7—11ChineseJourna1ofAnima】InfectiousDiseases·研究论文·抗狂犬病毒单克隆抗体的研制及应用廖园园，刘汉平，王威，彭杏，刘洁，朱薇，秦红刚，漆世华，温文生(武汉中博生物股份有限公司，武汉430070)摘要：应用杂交瘤技术获得4株分泌抗狂犬病毒(Rabiesvirus，RV)单克隆抗体细胞株，并对其特性进行分析。经鉴定，它们所分泌的抗体类型为IgG1，腹水效价为1：10～1：10，EL1SA法和间接免疫荧光检测(indirectimmunofluoreseen

2、tassay，IFA)结果表明：该4株单抗对RV有良好的特异性，对正常Vero细胞及人白蛋白和其他细胞培养物无非特异性反应。将这些单抗腹水进行ProteinG亲和层析纯化后获得的纯化抗体用于制备反相亲和层析柱，并以反相亲和层析法纯化RV以获得高纯度RV抗原。应用纯化的RV建立胶体金免疫层析法(gold—immunochromatographyassay，GICA)检测RV抗体血清，结果显示，GICA与标准ELISA法检测比较的总符合率为96．1％。关键词：狂犬病毒；单抗；反相亲和层析；胶体金；免疫层析中图分类号：$852．659．5：Q

3、78文献标识码：A文章编号：1674—6422(2010)05—0007—05GENERATIoNANDAPPLICATIoNoFTHEMoNoCLoNALANTIBoDIESToRABIESVIRUSLIAOYuan—yuan，LIUHan—ping，WANGWei，PENGXing，LIUJie，ZHUWei，QINHong—gang，QIShi—hua，WENWen—sheng(WuHanChopperBiologicalCo．，Ltd．，Wuhan430070，China)Abstract：Fourhybridomacellli

4、nessecretingmonoelonalantibodies(McAbs)torabiesviruswereestablishedandtheMcAbswerecharacterized．SubclassoftheseMcAbswaslgG1．Thetitersofasciticfluidswere1×10一1×10．InindirectELISAandIFAtests，alloffourMcAbsspecificallyreactedwithrabiesvirusbutdidnotreactwithVerocells．humana

5、lbuminandothercellcultures．TheMcAbswerepurifiedbyusingproteinGaffinitychromatograph，whichwerethenusedtoprepareanti—phaseaffinitychromatographtopurifyrabiesvirus．TherabiesVil31Spreparationwasusedtodevelopgold—immunochmmatography—assay(GICA)fordetectionofrabiesantibodiesin

6、theserumsamples．Thecomparativestudyshowed96．1％agreementbetweenGICAandELISAmethod．Keywords：Rabiesvirus；monoclonalantibodies；anti—phaseaffinitychromatograph；colloidalgold；immunochromatography狂犬病是由狂犬病毒(Rabiesvirus，RV)引起成很大威胁J。目前对狂犬病无有效治疗药物，的人畜共患传染病，其主要宿主为犬、猫等动物，疫苗接种是预防的有效办法

7、，但是疫苗接种后是典型症状为恐水症(又称恐水病)。本病极为凶否产生有效的保护抗体，开展免疫抗体水平监测险，病死率几乎为100％¨。我国是狂犬病的高是评估疫苗效果的方法之一，也是动态监测动物发国家，居世界第二位，仅次于印度J。根据部免疫效果的主要途径。为建立敏感、特异、快速分区域调查，我国家犬带毒率为8％～15％_3]，外的检测方法，提高检测结果的可靠性，本研究建观健康犬的脑内带毒率约15％，对人类的健康造立了分泌RV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞收稿日期：2010-08—10作者简介：廖园园，女，硕士，主要从事动物病毒体外诊断试剂的

8、研究通讯作者：刘汉平，E-mail：liuhpO81020@163．con·8·中国动物传染病学报2010年9月株，并对McAb进行鉴定。将获得的McAb对RV1．3杂交瘤细胞株的建立按常规方法将免抗原进行