抗麦草畏多克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立.pdf

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1、浙江大学学报(农业与生命科学版)38(2)：153～158，2012JournalofZhejiangUniversity(Agric．＆LifeSci．、文章编号：1008—9209(2012)02—0153—06DOI：10．3785／j．issn．1008—9209．2012．02．006抗麦草畏多克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立张花美，李因来，潘熙萍，蒋爱兰，余榛榛，施曼玲(杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江杭州310036)摘要为建立麦草畏的免疫分析方法，采用碳化二亚胺法将麦草畏(DIC)与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联，分剐合成

2、免疫原与包被原；用合成的免疫原免疫新西兰大白兔获得抗麦草畏多克隆抗体，该抗体效价为1；1．28×1O，且该抗体与麦草畏的结构类似物2，3，5一三氯苯甲酸、2，3，6一三氯苯甲酸、2一氨基一3，5一二氯苯甲酸的交叉反应率均小于0．1．以包被原1：8000和多抗溶液1：80000的稀释倍数为工作浓度，建立麦草畏间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法，此方法检测麦草畏的线性范围为1～100ng．mL一，线性回归方程为一8．6844In-z+15．0。1，R一0．9944，最低检测限为IC2。-=1．779ng．mL；玉米粉和面粉空白样品的麦草畏添加回收实验表明，麦草畏添加值

3、为5～30g-kgI1时，玉米粉中的麦草畏回收率为53．O8～92．37，面粉的回收率则分别为66．5～94．63．关键词麦草畏；多克隆抗体；间接竞争酶联免疫吸附试验中图分类号Q503；S482．4文献标志码AZHANGHua—mei，LIYin-lai，PANXi—ping，JIANGAi—lan，YUZhen-zhen，SHIMan-ling(CollegeofLfeandEnvironmentalSciences。HangzhouNormalUniversity，Hangzhou310036，China)Preparationofpolyclonalantibodya

4、gainstdicambaandestablishmentofindirectcompetitiveELISAfordicambadetection．JournalofZhejiangUniversity(Agrie．&LifeSci．)，2012，38(2)：153—158AbstractInordertoestablishtheimmunoassaymethodofdicamba(DIC)，thediiminecarbonizationmethodswereusedtosynthesizeimmunogenandcoatingantigenbydicambabeingc

5、onjugatedtoovalbumin(OVA)andbovineserumalbumin(BSA)，respectively．ThepolyelonalantibodiesagainstdicambawerepreparedthroughimmunizingNewZealandwhiterabbitswiththeimmunogen．Theenzyme-linkedimmunosorbentassayfELISA)titeroftheantibodywas1：1．28×10．Thepercentagesoftheantibodycrossreactivitywithot

6、heranaloguesofdicamba(2，3，5-trichlorobenzoicacid，2，3，6一trichlorobenzoicacidand2-amino一3，5-dichlor0benzoicacid)wereall1essthan0．1．AnindirectcompetitiveELISA(ciELISA)wasdevelopedfordicambadetection，withcoatingantigenandpolyclonalantibodydilutedat1：8000and1：80000．Thelinealrangeoftheassayforde

7、tectingdicambawas1to100ng．mL～，withthedetectionlimit(IC20)of1．779ng·mL～．TheregressionequationwasY一8．6844ln+15．001，R0—0．9944．Whendicambaadditionvaluewasfrom5to30g·kgintherecoverytests，therecoveryrateofdicambaincornmealandwheatflourblanksamplesrangedfrom53．O8to92