肿瘤的基因治疗_临床医学_医药卫生_专业资料.ppt

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1、第三章肿瘤的基因治疗GeneTherapy一基因治疗的概念◆通过分子生物学的方法将外源治疗基因导入靶细胞并有效表达，达到治疗疾病的目的。包括以下方式：基因校正或置换———基因打靶补赏性基因治疗非特异性基因治疗：导入与致病基因无直接关系的基因如细胞因子基因和自杀基因等干扰性基因治疗：如反义核酸治疗，包括反义RNA/反义DNA，抗核酸，核酶，干扰RNA等。一基因治疗的概念◆第一个基因治疗的例子——伴有酶缺陷的联合免疫缺陷症（1990，9，14，9岁女孩）缺陷基因——腺苷酸脱氨酶（ADA）DNA和RNA合成异常导致淋巴细胞特别是T淋巴细胞受到抑制，引起免疫缺陷症。治疗：取出

2、T淋巴细胞——体外培养增殖———导入正常的ADA基因并有效表达———输回患者体内二基因治疗的途径◆细胞介导的体外基因治疗（exvivogenetherapy）如上例◆原位基因治疗（insitugenetherapy）直接向患病部位注射/喷雾治疗基因◆体内基因治疗（invivogenetherapy）关键是建立靶向表达载体和确定基因表达水平。ApproachestoGeneTherapyGeneTherapyforGeneticDisease1)Exvivo:removecells,culture,transfer,return2)Insitu:transfergene

3、sintodeficienttissue3)Invivo:systemictransferofgenes体外基因的基本程序---治疗基因的选择---基因载体的选择，包括病毒载体和非病毒载体两大类---靶细胞的选择---基因转移，把治疗基因导入受体细胞的过程，是基因治疗的一根重要环节---外源基因表达的筛选---回输患者体内三基因转移方法即把外源治疗基因导入靶细胞并使其有效表达。（一）物理化学的方法--------非病毒转移显微注射法基因枪———微粒子轰击法电穿孔法脂质体法DNA-磷酸钙共沉淀法1.Non-viralgenetherapyNakedDNA(vector-

4、free)LiposomesProtein-DNAcomplexesGeneguCalciumphosphateprecipitationElectroporationIntracellularmicroinjectio-Humanartificialchromosomes◆Integratingviruses（整合病毒）Retrovirus(e.g.murineleukemiavirus)（逆转录病毒）Adeno-associatedvirus(only4kbpaccommodated)（腺相关病毒）Lentivirus（慢病毒）◆Non-Integratingvi

5、ruses（非整合病毒）Adenovirus（腺病毒）Alphavirus（甲病毒）HerpesSimplexVirus（HSV,单纯疱疹病毒）Vaccinia（痘苗病毒）B.（二）病毒载体转移技术-----常用的病毒三基因转移方法（二）病毒载体转移技术许多病毒DNA经过适当改造后，可用作载体把外源治疗基因转移到受体细胞，并使之有效表达。常用的病毒载体有：逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒等1逆转录病毒载体逆转录病毒DNA经适当改造后可作为载体优点：①转染效率高，可达到100﹪②可转导分裂活跃的细胞③外源基因可整合到染色体缺点：①不能转导非分裂细胞②导入的外源基因的长度≤

6、8kb③有一定的危险性（激活原癌基因、插入突变）B.IntegratingversusNon-IntegratingVirusesIntegratingvirusesRetrovirus(e.g.murineleukemiavirus)Adeno-associatedvirus(only4kbpaccommodated)Lentivirus（慢病毒）Non-IntegratingvirusesAdenovirusAlphavirus（甲病毒）HerpesSimplexVirus（HSV,单纯疱疹病毒）Vaccinia（痘苗病毒）i)RetroviralvectorsA

7、dvantages:doesn'tkillhostcellefficientlyentercellsintegrategenesstablyandheritablyDisadvantages:randomintegrationonlyaffectdividingcellsmayconverttovirulentstrainmayinduceinflammationA.RenderingvirusvectorharmlessRemoveharmfulgenes“cripple”thevirusExample–removalofenvgeneviru