基因敲除技术的研究进展.pdf

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1、中国兽医杂志2015年(第51卷)第3期67基因敲除技术的研究进展周维，付喜爱，张德显，田春莲，汉丽梅，刘明春(沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866)中图分类号：Q78文献标志码：A文章编号：0529—6005(2015)03—0067—02基因敲除(geneknockout)技术是于2O世纪8O年苷酸的包含5’磷酸、3’羧基末端以及2个游离核代建立并发展起来的分子生物学技术。该技术是苷酸的一系列片段的总称，具有强大的抑制基因以DNA同源重组技术和胚胎干细胞技术为基础，经功能的作用。siRNA能够与RNAi特异性酶结合过3O余年的发展，现今已

2、经有多种基因敲除技术被形成RNA诱导沉默复合物(RNA—inducedsilenc—应用于分子生物学、遗传学等诸多领域。ingcomplex，RISC)。RISC具有核酸内、外切酶和生物体基因功能的研究已经成为当下最热门解旋酶活性，能够精确介导与siRNA同源的的课题。现阶段基因功能的研究主要是通过减mRNA降解。siRNA介导RISC与同源性的mRNA弱或中止某一基因表达，观察生物体整体功能变结合，在解旋酶的作用下解开siRNA的双链，RISC化，推测该基因的相关功能，然后将基因与生物前体被激活，正义RNA单链被释放而反义RNA单整体功能相关联进行深

3、入探究，为最终确定基因链介导活化复合物，识别并结合到靶mRNA上，将功能提供依据。随着功能基因组学研究的深人，mRNA切割，通过核酸外切酶彻底降解切割片段，相关技术也得到不断地发展与完善，其中最为常造成转录信息缺失，从而封闭内源性基因的表达用的便是基因敲除技术。使该基因失活，以实现特定基因的敲除-z-。对不易获得突变体的生物而言，RNAi技术是1RNA干扰技术一种简便的研究基因功能的手段。Zhen等利用RNA干扰(RNAInterference，RNAi)是指内源性RNAi技术抑制猪颗粒细胞中CEBP[3基因表达，揭或外源性双链RNA(double—s

4、trandedRNA，dsRNA)示该基因对猪颗粒细胞的细胞周期、细胞凋亡以进入细胞后，在细胞内特异性降解与其同源的mRNA，及类固醇合成等方面的影响]。RNAi技术可以针从而抑制相应基因的表达，使细胞表现出特定基因对某一特定基因在特定发育阶段的功能进行研缺失的表型，该现象也被称为基因沉默u。究。郎国竣等采用RNAi技术，抑制家蚕不同发RNAi由小干扰RNA(smallintereferenceRNA育时期乙酰胆碱酯酶基因(AchE)表达，对家蚕的siRNA)引起，siRNA是由RNAaselII样Dicer酶作生长发育产生明显影响。用于dsRNA，使

5、dsRNA被切割成长度为21～23核2Red同源重组技术收稿日期：2014—03—17Zhang等先后研究发现，大肠杆菌中存在的RecE、基金项目：国家自然科学基金(31272601；31201954)RecT蛋白以及大肠杆菌入噬菌体的Exo和Beta蛋白作者简介：周维(1989一)，男，硕士生，从事兽医药理与毒理学研究，E—mail：warn1314head@163．COB都具有同源重组的能力，能够对大肠杆菌基因组进通讯作者：刘明春，E-mail：liumingchun@sina．com行精确的基因修饰。由于上述两个系统具有相似(6)：886—889

6、．andabaeteriophage[J】．BMCMicrobiol，2013．[18】LungrenMP，ChristensenD，KankotiaR，eta1．BacteriophageK【21】OliveiraA，SerenoR，AzeredoJ．InvivoeficiencyevaluationofaforreductionofStaphylococcusaureusbiofilmoncentralvenousphagecocktailincontrollingseverecolibacillosisinconfinedcon—catheter

7、material[J]．Bacteriophage，2013，3(4)：e26825．ditionsandexperimentalpoultryhouses[J】．VeterinaryMicrobiolo·【19】PastagiaM，SchuchR，FischettiVA，eta1．Lysins：thearrivalofgY，2010，146(3-4)：303—308．pathogen—directedanti—infectives[J1．JMedMicrobiol，2013，62[22】LangLH．FDAapprovesuseofbacteriop

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