人E钙粘着白上皮性钙黏附蛋白（E-Cad）酶联免疫分析.doc

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1、人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T15ng/L-400ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)水平。用纯化的人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)，再与HRP标记的E钙粘着蛋白/上皮

2、性钙黏附蛋白(E-Cad)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶789终止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份

3、2酶标试剂标准品（800ng/L）标准品稀释液3酶标包被板4样品稀释液5显色剂A液6显色剂B液10说明书11封板膜12密封袋2张1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。400ng/L200ng/L100ng/L50ng/L5号标准品4号标准品3号标准品2号

4、标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液25ng/L 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔

5、壁，轻轻晃动混匀。3.4.5.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.7.8.9.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（O

6、D值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样

7、均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如

8、与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月