西尼罗河病毒病竞争ELISA检测方法的初步建立及应用.pdf

《西尼罗河病毒病竞争ELISA检测方法的初步建立及应用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国动物检疫2011年第28卷第9期一3l一西尼罗河病毒病竞争ELlSA检测方法的初步建立及应用常娓娓，王淑娟，吴晓东’，刘华雷’，赵永刚，王志亮(1．中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心，山东青岛266032；2．扬州大学兽医学院，江苏扬州225009)摘要：本研究用表达的西尼罗河病毒(WNV)囊膜蛋白E结构域Ⅲ蛋白作为包被抗原，单抗8F4A4作为竞争检测抗体，初步建立了能够对乙型脑炎病毒(JEV)和WNV进行鉴别诊断的竞争EusA方法。优化的最佳抗原包被浓度为530rig／mE，单抗的最佳稀释倍数为1：8000，待检血清的最佳稀释倍数为1：10。通过对56份阴性样品进行检

2、测确定了该方法的临界值为30％，以此为判定标准对临床220份血清进行检测，结果均为阴性。此方法的建立弥补了商品化试剂盒不能区分JEV和WNV感染的缺陷，为我国西尼罗河病毒病的流行病学调查提供了一种有效的抗体检测方法。关键词：西尼罗河病毒；囊膜蛋白；单克隆抗体；竞争ELISA中图分类号：$852．659．6文献标识码：A文章编号：1005．944X(2011)09-0031-04DevelopmentandApplicationofaCompetitiveEnzyme-LinkedlmmunosorbentAssayfortheDetectionofAntibodyagainstWestNi

3、leVirusChangWeiwei‘，WangShujuan，WuXiaodong，LiuHualei，ZhaoYonggang，WangZhiliang(1．NationalDiagnosticCenterofAnimalExoticInfectiousDiseases，ChineseNationalCenterforAnimalHealthandEpidemiology，Qingdao，266032：2．CollegeofVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity，Yangzhou，225009)A1)sI嘲ctlAcELISAfordetection

4、ofWNVantibodywasestablishedusingpurified、EproteindomainⅢasantigencoatingtheELISAplateandmonoclonalantibody8F4A4specifictoWNVascompetitivedetectionantibody．TheresultsshowedthattheantigencoatconcentrationWas530ng／mL，thebestdilutionofMcAb8F4A4was1：8000andthebestserumdilutionWas1：10．Atotalof56clinical

5、lyconfirmednegativecontrolseraweretestedbythecELISA．Throughanalysis，itwasconcludedthatthecut-ofvaluewas30％．Asetof220clinicalserunlsamplesweretestedbythecELISAandallwerenegative．Contrasttothecommercialkits，themethodcoulddiferentiatetheJEVand、)l，antibody，providinganeficientantibodydetectionmethodfor

6、theWestNilevirusdiseaseepidemiologyinvestigationinoBrcountry．~woras,WestNilevirus(WNV)；Envelopeprotein；Monlclonalantibody；cELISA西尼罗河热(WestNileFever)是由西尼罗河病毒(WNV)引起的一种人畜共患急性传染病。因于通讯作者：王志亮1937年首次从非洲乌干达西尼罗河地区一名发热的classINewcastlediseasevirusisolatesfromHongKonglivebirdbypassaginginchickens[J]．Virol，20

7、02，301(2)：206—211．marketsanddetectionusingrea1．timereversetranscription．．PeR【14]CollinsMS，BashiruddinJB，AlexanderDJ．Deducedamino[J]．JClinMicrobiol，2007，45(4)：13l0．1314．acidsequencesatthefusionproteincleavagesiteo