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《黄杆菌肝素酶Ⅱ重组菌培养条件的优化及高密度发酵.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物工程学报周斌等/黄杆菌肝素酶II重组菌培养条件的优化及高密度发酵ChineseJournalofBiOtechn010gyhttp://journals.im.ac,cn/cjbcnApril25,2014。30(4):674—678DOI:10.13345/j.cjb.130414~2014ChinJBiotech,Allrightsreserved黄杆菌肝素酶II重组菌培养条件的优化及高密度发酵周斌,程咏梅,邓超2刘卫超,陈潮梁,陈敬华1,许正宏1江南大学药学院,江苏无锡2141222江南大学无锡医学院,江苏无锡214122
2、周斌,程咏梅,邓超,等.黄杆菌肝素酶II重组菌培养条件的优化及高密度发酵.生物工程学报,2014,3O(4):674—678.ZhouB,ChengYM,DengC,eta1.CultureconditionsoptimizationandhighcelldensityfermentationofrecombinantbacteriaproducingheparinaseIIfromFlavobacteriumheparinum.ChinJBiotech,2014,3O(4):674—678.摘要:黄杆菌肝素酶II(HepII)是一
3、类可特异性切割肝素、硫酸乙酰肝素类分子内连接键的酶。文中对黄杆菌肝素酶II重组菌的诱导时机、诱导剂添加量、诱导温度、诱导时间等诱导产酶条件进行优化。经过优化最佳摇瓶发酵产酶条件为:37oC培养重组菌至对数生长前期,添加诱导剂IPTG至终浓度为0-3g/L,20℃下诱导10h,酶活达到最高,为570U/L。在此基础上通过发酵罐高密度培养手段将菌体浓度OD600进一步提高到98,酶活大幅度提高到9436U/L,该研究结果为HepII的工业化生产与应用奠定了良好的基础。关键词:肝素酶II,培养条件优化,高密度发酵CuUlturecondi
4、tilonsoptimizationandhig2hcelldensityfermentationofrecombinantbacteriaproducingheparinaseIIfromFlavobacteriumheparinumBinZhou,YongmeiCheng,ChaoDeng,WeichaoLiu,ChaoliangChen,JinghuaChen,andZhenghongXu1SchoolofPharmaceuticalScience,JiangnanUniversity,Wuxi214122,Jiangsu,C
5、hina2WuxiMedicalSchool,JiangnanUniversity,Wuxi214122,Jiangsu,ChinaAbstract:HeparinaseIJ(HepIIfromFlavobacteriumheparinumiSanenzymethatcouldspecificallycleavecertainsequenceofheparinandheparansulfate.Inthiswork,fermentationconditionsofrecombinantheparinaseII(His.HepII1p
6、roducingbacteriawereoptimized,includinginitialinductiontime,inducer(IPTG)concentration,inductiontemperatureandinductiontime.Theoptimumconditionswereasfollows:cultivatingrecombinantbacteriatoexponentia1prophaseunder37℃.thenaddingIPTGtoafinalconcentrationof0_3g/L,finally
7、cultivatingrecombinantbacteriaunder2O℃f0rl0h.Thetotalcrudeenzvmeactivityreached570U/L.Basedontheseresults.higheelldensityfermentationofrecombinantbacteriawasstudied.Thefinal∞600couldreach98andthetotalcrudeenzymeactivityofHis。HepIIincreasedto9436U/L.Keywords:heparinaseI
8、I,cultureconditionsoptimization,highcelldensityfermentation肝素酶是指一类作用于肝素或者硫酸乙酰肝素主要为肝素酶I、II、III三种”。其中肝素酶Ⅱ有的多糖裂解酶。目前从肝素黄
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