黄芪莪术配伍对人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影响.pdf

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1、时珍国医国药2014年第25卷第3期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2014VOL．25NO．3黄芪莪术配伍对人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影响臧文华，唐德才，尹刚，李冰冰(南京中医药大学基础医学院，江苏南京210046)捅要：目的探讨补气活血药黄芪、莪术配伍对人肝癌裸鼠原位移植瘤新生血管生成的影响。方法构建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型。成瘤后，将其随机分为5组：模型对照组、顺铂组(DDP)(2mkgDDP腹腔注射)、黄芪莪术配伍高剂量组(H)[12g／(kg·d)灌胃]、黄芪莪术配伍中剂量组(M)[6g／(kg·

2、d)灌胃]、黄芪莪术配伍低剂量组(L)[3g／(kg．d)灌胃]，每组8只。观察黄芪、莪术配伍对原位移植瘤的作用，免疫组化sP法检测肿瘤组织HIF一1、VEGF的表达。结果H、M、L组的瘤重抑制率为41．55％、26．48％、24．66％，瘤体积抑制率为42．91％、25．05％、23．95％，能抑制原位移植瘤的生长，H组与模型对照组比较有极显著差异(P<0．01)。免疫组化结果提示，H、M、L组HIF一1Ot、VEGF阳性表达IOD值均下降，与模型对照组比较有显著性差异(P<0．05，P<0．O1)。结论黄芪、莪术配伍对人肝癌裸鼠原位移植瘤的生长有抑制作用，并能

3、抑制肿瘤新生血管生成，其机制可能与对HIF一10l、VEGF表达的抑制有关。关键词：黄芪；莪术；肝细胞癌；裸鼠；新生血管D0I标识：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2014．03．002中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1008-0805(2014)03-0516-03肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)具有高侵袭、易复公司，动物许可证号：SCXK(沪)2012—0006，5～6周龄，体质量发、预后差的临床病理特点，严重威胁患者的健康甚至生命，其易18～20g，裸鼠置于恒温(24～27℃)、恒湿

4、(45％～50％)、新鲜空转移、复发率高是制约预后改善的瓶颈⋯。中药配伍及其提取气高度除尘除菌、无特殊病原菌(SPF)环境下，用高压灭菌饮用物抗肿瘤作用日益受到重视。本研究采用肝癌原位移植整体水、co辐射灭菌的专用颗粒饲料及co辐射灭菌SPF小鼠垫料动物模型，对补气活血药物黄芪与莪术两药配伍治疗肝癌进行疗分笼喂养。效观察，采用免疫组化技术检测HIF一1、VEGF的表达，探讨补1．3仪器GBB16CO培养箱(德国Heraen公司)，YJ一1450型气活血法对肝癌新生血管生成的影响，为丰富和发展方剂配伍理超净工作台(苏州净化设备厂)，台式低速离心机(LDS—ZA，中论

5、，指导临床安全合理用药提供科学依据。国北京医用离心机厂)，微量移液器(德国Eppendof公司)，倒置1材料相差电子显微镜(Et本Olympus产品)，石蜡切片机(RM2135，德1．1药品与试剂根据课题组前期研究结果，莪术品种采用国Leica公司产品)。温郁金。黄芪、莪术分别购自产地内蒙古、浙江，经南京中医药大2方法学药学院吴德康教授鉴定，分别为豆科植物蒙古黄芪Astragalus2．1HepG2细胞培养将人肝癌HepG2细胞置于含10％小牛血membranaceus(Fisch．)Bge．var．mongholicus(Bge．)Hsiao的干燥清、青霉素(1

6、00U／m1)、链霉素(mOU／m))的RPMI1640培养液根以及姜科植物温郁金CurcumawenyujinY．H．ChenetC．Ling中，37℃、5％CO，条件下培养，细胞贴壁生长，细胞生长至3d左的干燥根茎。注射用顺铂(齐鲁制药有限公司，批号右，于倒置显微镜下观察细胞长满贴壁，即可传代，每3天传代1H20073652)。细胞培养液RPMI1640(美国Gibco公司)；新生小次。牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司产品，批号040622)；2．2造模取对数生长期的人肝癌HepG2细胞，注射到裸鼠颈胰蛋白酶(美国Gibco公司)；兔抗人HIF一1单克隆

7、抗体(美国部皮下(每只接种HepG2细胞5×10。／100~1)，1周左右出现肉Bioword公司)；兔抗人VEGF单克隆抗体(美国Bioword公司)；眼可见肿瘤，3周肿瘤生长至0．8cm×1．0cm×1．2cm时处死荷瘤sP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物科技有限裸鼠，无菌条件下剥离瘤体，放入RPMI1640培养液中，剔除结缔公司。组织，将肿瘤组织分割成1mm×1mm×1mm的组织碎块。另取1．2细胞株与动物人肝癌细胞株HepG2，购于扬州大学中心一批裸鼠用1％戊巴比妥钠40mg／kg行腹腔注射麻醉，手术视野细胞库。BALB／c雄性裸鼠，购于上海

8、斯莱克实验