间充质干细胞旁分泌物质诱导肝星状细胞凋亡的体外研究.pdf

《间充质干细胞旁分泌物质诱导肝星状细胞凋亡的体外研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、南京医科大学学报(自然科学版)第34卷第8期·1040·ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(NaturalScience)2014年8月间充质干细胞旁分泌物质诱导肝星状细胞凋亡的体外研究徐唬，施启鹏，周晗，蔡洁，李军，章莉莉(南京医科大学第一附属医院感染病科，江苏南京210029)[摘要]目的：研究间充质干细胞(mesenchymalstemcell，MSC)旁分泌物质对活化的肝星状细胞Lx一2的影响及作用机制。方法：应用6孔塑料细胞培养板，每孔使用半透膜，构建Transwell共培养体系；将骨髓来源的间充质干细胞(bonema~owme

2、senchymalstemcell，BM．MSC)和人肝星状细胞系Lx一2分别接种在体系的上下层，并把此组作为实验组，单独培养的Lx一2作为对照组，观察培养液中MSC旁分泌物质对Lx．2的影响。采用流式细胞术及Hoeehst33342染色法分别检测Lx．2细胞凋亡的情况，qRT—PCR和Westernblot检测k．2中解耦联蛋白2(uncouplingprotein2，UCP2)的mRNA和蛋白水平的表达量，荧光探针法检测Lx．2细胞内及线粒体中活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的荧光强度，采用硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid，

3、TBA)法检测细胞丙二醛(mal0ndialdehyde，MDA)的含量。结果：与对照组相比，Hoechst33342染色后可见部分Lx．2染色质固缩、颗粒状荧光等凋亡细胞典型表现，实验组Lx。2凋亡率是对照组的2．6倍(P<0．05)。实验组Lx．2中UCP2mRNA及蛋白表达量显著低于对照组(P<0．05)；实验组Lx一2细胞内和线粒体中ROS水平明显升高。细胞培养上清中MDA为(0．43±0．47)mmo~L，显著高于对照组(0．16±0．43)mmol／L(P<0．05)。结论：MSC旁分泌物质有诱导Lx一2细胞凋亡的作用；可能与MSC旁分泌物质抑制UCP2的表达，

4、促进细胞内及线粒体ROS过量生成有关。[关键词]间充质干细胞；旁分泌；肝星状细胞；凋亡；活性氧；解耦联蛋白2[中图分类号]Q255[文献标志码]A[文章编号]lOO7-4368(2o14)08—1040—06doi：10．7655／NYDXBNS20140808Humanmesenchymalstemcellssecretedfactorsinducingapoptosisofhepaticstellatecells／nvitroXuLiang，ShiQipeng，ZhouHan，CaiJie，LiJun，ZhangLili(DepartmentofInfectiousDi

5、sease，theFirstAffiliatedHospitalofNJMU，Nanjing210029，China)[Abstract]0bjeetive：Toobservetheparacrineeffectsofmesenchymalstemcells(MSC)ontheactivatedhepaticstellatecellsLx一2，andexplorethepossiblemechanisms．Methods：Aco-culturesystemwasestablishedbyculturingbonemarrowmesenchymalstemcell(BM—MS

6、C)intheTranswellinsertandLx一2ontheplasticplates(6wel1)，whichwereplacedontheupperandlowerlayerrepectively，andsetitastheexperimentgroup．NormalLx一2wasculturedaloneascontro1．CellapoptosiswasdeterminedbyHoechst33342stainingandflowcytometry，respectively．Theexpressionsofuncouplingprotein2(UCP2)mR

7、NAandproteininLx-2weredetectedbyquantitativereal—timePCR(qRT—PCR)andWesternblot，respectively．Intracellularandmitochondrialreactiveoxygenspecies(ROS)levelsofLx一2weremeasuredbyfluorescentprobemethod．ThecontentofMDAinco—culturesupernatantwasdeterminedbythiobarbit