红麻野败型CMS胞质SNP分子标签的发掘.pdf

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1、西北植物学报，2012，32(12)：24122418ActaBot．Borea1．-Occident．Sin．文章编号：1000—4025(2012)12—241207红麻野败型CMS胞质SNP分子标签的发掘金l冈0，牛英。，唐向民，周琼，周瑞阳(1广西大学农学院，南宁530005；2广西壮族自治区亚热带作物研究所，南宁530001；3广西柑桔研究所，广西桂林541004)摘要：利用同源克隆的方法，克隆了红麻野败型CMS胞质SRAP标记位点Me14上游的侧翼序列，并采用RTPCR方法研究该位点的表达。结果表明：(1)红麻不育系P3A和保持系P3B的mtDNA在Mel4结合位点处存在1个

2、G／ASNP位点；HpaⅡ内切酶可特异性酶切以保持系P3B扩增获得的E1纯化片段，而不育系P3A的E1纯化片段不能被酶切。(2)对红麻的9对不育系／保持系、5个恢复系和F杂交种在该SNP位点的分析发现，以保持系和恢复系总DNA为模板扩增获得的E1纯化片段均可为HpaII内切酶特异性酶切，而不育系和F。杂交种的E1纯化片段不能被酶切。(3)RT—PCR结果表明，E1片段对应基因在不育系P3A和保持系P3B中的时空表达模式无差异，在GenBank中也没有与E1相匹配的蛋白序列。研究表明，该研究发掘的红麻CMS胞质SNP标记位点处，不育系的mtDNA存在点突变，该标签并非具有嵌合阅读框的不育基

3、因。关键词：红麻；细胞质雄性不育；线粒体；SRAP；SNP中图分类号：Q789文献标志码：ADiscoveryofAnSNPMarkerAssociatedwithCMSCytoplasminKenaf(Hibiscuscannabinus)JINGang～，NIUYing。，TANGXiang—min，ZHOUQiong。ZHOURui—yang(1CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；2GuangxiSubtropicalCropsResearchInstitute，Nanning530001，China

4、；3GuangxiCitrusResearchInstitute，Guilin，Guangxi541004，China)Abstract：AnalysiswascarriedouttoexplorethenatureofMel4／Em8markerforkenafWA—CMScyto—plasmanddevelopthemorecrediblemarkerslinkedtokenafCMScytoplasm．Theupstreamflankingse—quenceofMel4bindingsitewasamplifiedbyhomologuecloning．Semi—quantitati

5、veRT—PCRwasusedtoanalyzetheexpressionlevelsofthe1ociindifferenttissues．(1)ThesequencesanalysisshowedaG／ASNPintheMel4bindingsiteoftheCMSline(P3A)anditsmaintainer1ine(P3B)mtDNA．PurifiedE1PCRproductamplifiedusingthetotalDNAofP3BastemplatecanbedigestedbyHpaⅡbecauseofthe“CCGG”sequenceintheMe14bindings

6、ite，incontrastwiththatofP3Abecauseofthe“CCGA”sequenceinthecorrespondinglOCUS．(2)ThecharacteristicsoftheSNPlocishowedthattheE1fragmentsthatwereamplifiedusingthetotalDNAoftheninemaintainerandthefiverestorerlinesastemplatecanbedigestedbyHpaII，incontrastwiththatofthenineCMSlinesandtheF1hybrids．(3)RT—

7、PCRresultsalsoshowedtheexistenceofE1transcripts．However，nodifferenceswerefoundintheexpressionpatternsbetweenP3AandP3B．Blastxsearchesofpubliclyavailablegeneandproteindatabasesdidnotproduceanystatisti—callysignificant“hi