《基因工程的基本操作程序》课件（新人教版选修3）.ppt

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1、基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤：目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取1、目的基因的来源2、获取目的基因的常用方法①从自然界已有的物种分离②人工方法合成①从基因文库中直接获取②如果需要大量的目的基因，需要对目的基因进行PCR技术扩增（一）从基因文库中直接获取按照外源DNA片段的来源：从特定组织提取的染色体基因组DNA---基因组DNA文库（总）mRNA反转录成的cDNA拷贝----cDNA文库（部分）②基因文库的目的为了在不

2、知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。①基因文库的分类限制酶基因组DNA基因重组转化细菌体外包装（一）从基因文库中直接获取基因组文库（一）从基因文库中直接获取1.基因文库基因重组反转录酶mRNAcDNA2.部分基因文库（二）利用PCR扩增目的基因1、过程高温变性（解旋为单链）低温退火（引物与单链互补结合）适温延伸（在Taq酶的作用下合成与模板互补的DNA双链）重复循环1、过程（二）利用PCR扩增目的基因（二）利用PCR扩增目的基因2、条件已知基因的核苷酸序列、四种脱氧核苷酸、引物Taq

3、DNA聚合酶使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增4、结果耐高温3、方式：以指数方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）2n适宜的温度和PH值思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？2、构建过程目的基因启动子终止子标记基因复制原点1、基因表达载体的组成想一想：其中有两个DNA片段连接形成的的产物有几种？①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构②用到的工具酶：既用到限制酶切割载

4、体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。注意1、导入植物细胞①农杆菌转化法:表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞②基因枪法③花粉管通道法显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中2、导入动物细胞3、导入微生物细胞①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子②方法：1、分

5、子水平的检测：分子杂交技术①检测是否插入目的基因②检测是否转录出mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质2、个体水平的鉴定DNA分子杂交技术抗体与相应的蛋白质进行抗原－抗体杂交，看是否有杂交带分子杂交技术四、目的基因的检测与鉴定归纳:基因工程的基本操作程序获取目的基因从基因文库利用PCR技术构建基因表达载体目的基因、启动子、终止子、标记基因将目的基因导入受体细胞农杆菌转化法、显微注射法、基因枪法目的基因的检测与鉴定检测：是否插入、转录、翻译、个体水平的检测1．有关基因工程的叙述正确的是()A．限制

6、酶只在获取目的基因时才用B．重组质粒的形成是在细胞内完成的C．质粒都可以作为运载体D．蛋白质的氨基酸排列顺序可以为合成目的基因提供线索练习：2．科学家已经能够通过基因工程的方法，能使番茄果肉细胞中含有人奶蛋白。以下有关该基因工程的叙述错误的是（　）A.采用反转录的方法得到的目的基因有启动子、终止子B.用同种限制酶处理质粒和含目的基因的DNA，可产生相同的黏性末端而形成重组DNA分子C.番茄的叶肉细胞可作为受体细胞D.启动子对于目的基因在番茄的叶肉细胞中的表达是不可缺少的B．复性过程中引物与DNA

7、模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高3．多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现3、假设以大肠杆菌质粒作为运载体

8、，并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因，将切割后的运载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。连接产物至少有_________种DNA分子，它们分别是_________。基因工程又叫基因拼接技术。1、在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的___________为模板，__________成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成————。求是_________。2、基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、______。若将真核基因在原核细胞中表达，对该目的基因的