【精品】下游技术.doc

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1、名词解释:1、包含体:存在于基因工程细胞中,主要由蛋白质构成，其中大部分是克隆表达的产物，这些产物在一级结构上是正确的，但在立体结构上却是错误的，因此没有生物学活性。难溶于水，只有在变性剂溶液中才能溶解。2、浓差极化:指在分离过程中，料液中的溶剂在压力驱动下透过膜，溶质被截留，于是在膜表面与临近膜面区域浓度越来越高。在浓度梯度作用下，滚质由膜面向本体溶液扩散，形成边界层，使流体阻力与局部渗透压增加，从而导致溶剂透过量下降。溶剂向膜面流动引起溶质向膜面的流动，这种流动如果与浓度梯度所驱动的溶质向本体溶

2、液扩散的速度平衡时，在膜面附近就形成一个稳定的浓度梯度区，这一区域就称为浓度极化边界层，这一现象称为浓差极化。浓差极化是一个可逆的过程；3、双水相萃取:利用被提取物在二相中的分配不同而实现分离的目的；由于蛋白质在有机相中容易失活，因此采用的二相均为亲水相，如PEG/葡聚糖、PEG/无机盐等，称为双水相，两相密度不同，轻相富含一种高分子，重相可能富含另一高分子，细胞碎片和蛋白质在二相间的分配系数不同，从而实现分离的目的。4、离子交换色谱:组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力

3、的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关，随着流动相的pH值及置换剂浓度的变化而变化。5、连续培养反应器:不断地往反应器中加入营养物，利用罐中的菌体增殖得到产物,并不断采出。在良好的控制下，罐内菌体的增殖速度可以与采出速度相同而达到稳态。6、蛋白质的复性:包含体蛋白质溶解于变性剂溶液中，呈变性状态，所有的氢键、疏水键全部被破坏，疏水侧链完全暴露，但一级结构和共价键不被破坏，当除去变性剂后，一部分蛋白质可以自动折叠成具有活性的正确构型，这一折叠过程称为蛋白质复性。7、分配系数:在一定温度下，组分在两相间

4、分配达到平衡时的浓度（单位：g/mL）比，称为分配系数，用K表示8、微囊化培养：是固定化技术中的一种,是用一层亲水性的半透膜将酶、辅酶、蛋白质等生物大分子或动植物细胞包围在珠状的微囊里，从而使得酶等生物丸分子和细胞不能从微囊里逸出，而小分子的物质、培养基的营养物质可以自由出入半透膜，达到催化或培养的目的。9、切向流过滤:就是一种维持恒压下高过滤速度的技术，其原理就是：使悬浮液在过滤介质表面作切向流动，利用液体的剪切作用将介质表面的固体移走，当移走固体与固体沉积速率相同时，过滤速度就保持恒定，控制不同

5、的切向流速度就可以得到不同的过滤速度。10、有效柱长:溶质从开始迁移至其迁移速度等于流动相速度时，溶质在色谱柱上迁移的距离称为有效迁移距离。二：填空题1.超声波破碎细胞的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及细胞类型等因素有关。2.目前用于固液分离的膜过滤法主要有以下三种：微孔过滤（微滤）、超滤、反渗透。3.在生物工程下游技术领域，色谱和鯉是目前所知最好的两种分离蛋白的方法。4.在生物物质分离中，可以依据一次进样量多少，将色谱分为：分析色谱、半制备色谱（中等规模制备色谱）、制备色谱和工业生产规模色谱

6、4大类。5.无论是什么类型的液相或气相色谱，其色谱装置均应包括：流动相供给、进样、色谱柱、检测器等四大部分。6.评价HPLC色谱填料性能的主要表征指标包括：保留值，选择性，柱效率，填充柱的空喜和穿透性，分离度。7.请列举任意四种破碎细胞的方法：高压匀浆法、高速珠磨法、超声破碎、化学渗透法。8.常见的无机色谱填料主要包括：硅胶、可控孔径玻璃、氧化铝、氧化钛、務基磷灰石、碳、石墨等基质。9.指出蛋白质复性的三种方法：稀释法，透析法，液色色谱法等三.1•错2•对错谱对。对3.色4.散5.10.固液分离的主

7、要方式包括：离心法，过滤法，双水相萃取，泡沫分离法。判断题作为动物细胞培养的优良微载体应该是刚性的。利用聚赖氨酸/海藻酸系统进行的细胞微囊化培养，所形成的微囊外膜的孔径的大小咅要是由聚赖氨酸的分子量所决定的。硅胶在pHl'14的范围内都很稳定，因此适合于在极端pH条件下的离子交换HPLC填料的颗粒粒度的分布应该是越小越好的，最好是能实现颗粒的单分只要样品进样量足够大，色谱过程就是一种非线性色谱。错微波加热法破碎细胞特别适合于对热（不）稳定的的产物的提取。微波加热法破碎细胞特别适合于对热（不）稳定的的

8、产物的提取。四：选择题C1.在蛋白质进取过程中进行细胞破碎的目的是：（A）追求最大.的破碎率；（B）使细胞内容物全部释放出来；（C）使目标物质最大限度释放出来；（D）使下阶段的过滤阶段速度更快。B2.超声破碎细胞的原理是：（A）固体剪切力；（B）液体剪切力；（C）非机械剪切力；（D）声波直接作用于细胞膜使细胞破裂。C3.对于HPLC填料的颗粒大小，下列提法哪种是正确的：（A）制备型HPLC填料以小颗粒为佳；（B）HPLC填料的颗粒越丸越好；（C）HPLC填料必须具有合