培养基母液配制.doc

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1、培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。MS培养基母液及培养基配方法参考表2。大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺

2、序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。培养基中的铁盐母液一般单独配制。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。称取Na2-EDTA3.73g，FeSO4·2H2O2.78g，分别溶解

3、（可加热），然后混合定溶于1000ml容量瓶中。转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。 植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为0.01、0.1、0.2、0.5或1mg/l。如配0.5mg/lNAA母液，称25mgNAA溶于50ml重蒸馏水，或50mg的NAA定溶于100ml重蒸馏水中。IAA要用棕色

4、瓶暗中贮存，以免光照分解。常用植物生长调节物质和维生素特征见表3。生长素为醇溶性物质，配制时，应用少量95%酒精或稀碱溶解，然后用重蒸馏水溶解定容；细胞分裂素应先用少量1NNaOH或HCl溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好的母液放置在4℃普通冰箱中备用。这些母液保存时间不宜过长，当出现沉淀、浑浊及霉菌团时，应重新配制。椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质，如KT类似物（9-β-D-ribofuranosylzeatin）、玉米素及玉米素核糖甙等，有时可与细胞分裂素相互代替。采集到椰子时，应检查其汁液（保证没有变质），煮沸，滤纸过滤掉蛋白，高温高压消毒，贮存在-20℃下备用。有时可直接加入

5、培养基。酵母提取液也一般也现用现配，称量酵母粉后，加热至沸腾30分钟，过滤去渣。 四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。表1 MS培养基大量元素母液制备 序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10称量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl2·2H2O 44044004MgSO4·7H2O37037005KH2PO4170

6、1700 注意：(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。２、微量元素母液

7、的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe）组成。微量元素用量较少，特别是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用电光天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。表2  MS培养基微量Ⅰ的配制 序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大100倍称量(mg)1MnSO4·4H2O22.322302ZnSO4·7H2O8.68603H3BO36.2620