噬菌斑测病毒滴度.doc

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1、`杆状病毒滴度检测实验概要本实验介绍了检测病毒滴度的方法。                        实验原理根据噬菌斑数计算病毒滴度。工具/原料·1.4%agarosegel：2gagrose 50ml水，高压灭菌·2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen）0.07gNaHCO3H2O，调PH6.1，定容至100ml，无菌过滤·supplementedGrace：1×Grace添加3.33mg/mlLactalbumin，3.33mg/mlyeastolate，无菌过滤·4.高温灭活FBS·主要设备1.6孔板2.1

2、2ml离心管3.100ml无菌玻璃瓶4.无菌吸管5.70℃水浴锅·实验材料杆状病毒，SF9：5×105cells/ml方法/步骤1.1无菌条件下，2ml/孔细胞（5×105cells/ml）种入6孔板，室温孵育1h使其贴壁，孵育后镜检其贴壁程度；2.2将4%agarosegel放入70℃水浴锅融解，空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热；3.3将杆状病毒用无血清supplementedGrace梯度稀释：10-1~10-8。4.4弃6孔板上清，快速加入稀释好的病毒，1ml/孔，复孔，室温孵育1h。5.5配置上层琼脂：加20ml高温灭活FBS到2×G

3、race100ml，25ml2×Grace（含FBS）12.5mlWord文档`无菌水12.5ml4%agarosegel，至预热的100ml无菌瓶，轻轻混匀，放入37℃水浴锅备用；1.6弃6孔板上清，快速加2ml上层琼脂，以防菌层干燥，静置10-20min使其凝固；2.7将6孔板放入27℃培养箱，培养4－10天；3.8计数板中噬菌斑，直至连续两天无变化，加1mg/ml中性红0.5ml，室温孵育2h后计数噬菌斑。END注意事项·病毒滴度（pfu/ml）=1/稀释倍数×噬菌斑数×1/每孔接种体积滴度Word文档`①某一物质与一定容量的另一物质产生反应所需的量。②所谓

4、滴度即病毒悬液的浓度，就是指pfu的数值。③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的1：180的稀释度，其滴度就是180。效价是滴度的同义词。效价即滴度，两者通用。当前虽然专业的化学和免疫学词典和专著中对这些词的使用已规化，但在不少书刊的文章中常见误用，如称效价1：40之类。④在化学反应中，指产生某一结果所需标准试剂的量。⑤为当量浓度的二十分之一。在制碱与制碳酸氢铵中用以表示氨水的浓度。⑥在免疫学中，指通过血清学方法能显示一定反应的抗体或抗血清的最高稀释倍数；如终点稀释度为1/100，则血清的效价（每1ml的血清中抗体效价）为100抗体单位。⑦在病毒学中，指用噬菌斑方法测

5、得的噬菌体浓度。噬菌体的效价（滴度）就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。中文名：滴度英文名：titer；titre同义名：效价符号：tt效价测定的方法：一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或滴度)一般不用病毒粒子的绝对数目而是用噬菌斑形成单位(Plague-formingunits，简写成pfu)表示。病毒滴度也即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有最小

6、致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半数致死量（LD50），其中以LD50最常用。它是指在一定时间能使半数实验动物致死的病毒量。然而，病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志，例如以感染发病作指标，则可以半数感染量（ID50）测定；此外，当实验的材料是鸡胚时则用鸡胚半数致死量（ELD50）或鸡胚半数感染量（EID50）表示；实验的材料是细胞时则用组织细胞培养半数感染量（TCID50）表示。Word文档