冷冻超薄切片原理和使用.doc

《冷冻超薄切片原理和使用.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、冷冻超薄切片原理和使用冷冻超薄切片技术是一种为了研究更接近于生物生活状态结构和功能而发展起来的电镜样品制备技术。它是把样品进行冷冻固定后，进行超薄切片，省去了经典超薄切片法的长时间的固定、脱水和也埋等处理。样励在切片前后，不经过强烈的化学处理，约胞结构能得到很好的保存；尤其是可溶性成分小会被抽提，使得电镜图像更接近于生物的生活状态。可用于细胞免疫化学、可溶性成分自显影、尤其在X射线微区成分分析等研究中。冷冻超薄切片机操作：在超薄切片机上加上高压冷冻仪冷冻附件就可进行。冷冻超薄切片的制备程序可为两类：1.无溶液制备法：包括取材、快速冷踪、冷冻替代、切片、干燥

2、、染色或不染色、镜检等几个步骤。主要用于可溶性物质的放射白显影和X射线微区分析。2.固定样品制备法：包括取材、醛类阑定、样品包埋或不包埋、冷冻保护处IR、快速冷冻切片、染包及镜检等步骤。适用于进行形态学、细胞化学和免疫细胞化学研究。用户经培训后取得资格可自行使用超薄切片机，使用步骤如下：1）开机2）检查是否处于切片模式，检查顶光底光是否亮度正常；3）将包埋块放入适当夹头并用六角扳手旋紧，以固定包埋块；（然后将夹头安装在修快台进行修快）；4）将夹头放入机械臂，并用手旋好螺丝上紧夹头（不可用六角扳手）；5）将玻璃刀/钻石刀安装在刀台上，用手旋好螺丝以固定刀，并

3、注意检查刀台是否固定于底座上；6）检查刀间隙角，调整刀台角，选择适当的夹头角度等；7）设定切片窗口（上下范围）；8）对刀；9）选择所用切片速度和厚度；10） 在刀槽内注水，注意水面平整；11） 切片、捞片；12） 关机、清理切片机，拿走个人物品，保持切片台面整洁；13） 登记使用记录。