动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法.doc

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1、动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法1范围本标准适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留量检测。2测定方法2.1方法提要或原理用磷酸盐缓冲溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。以磷酸—乙腈为流动相。用高效液相色谱—荧光检测法测定，外标法定量。2.2试剂和材料2.2.15mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液14mL，加水稀释至50mL。2.2.20.03mol/L氢氧化钠溶液：取5mol/L氢氧化钠溶液0.6m

2、L，加水稀释至100mL。2.2.30.05mol/L磷酸—三乙胺溶液：取浓磷酸3.4mL，用水稀释至1000mL。用三乙胺调节pH值至2.4（以配4L溶液为例，取浓磷酸3.4mL×4=13.6mL，加水使成4000mL，用三乙胺调pH值至2.4）。2.2.4磷酸盐缓冲溶液（用于肌肉、脂肪组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。2.2.5磷酸盐溶液（用于肝脏、肾脏组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500mL，pH值为4.

3、0~5.0。2.2.6标准储备液：分别取达氟沙星对照品约10mg,恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各约50mg,精密称定，用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为0.2mg/mL(达氟沙星)和1mg/mL（恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星）的标准工作液。置2℃~8℃冰箱中保存，有效期为1周。2.2.7对照品溶液稀释步骤（1）对照品储备液浓度：1mg/mL（2）最大残留限量（100μg/kg→100ng/g）上机浓度为0.05μg/kg：1mg/mL×1mL50→20μg/mL20μg/mL×

4、0.5mL200→0.05μg/kg（此浓度对应最大残留限量浓度，因为20mL提取液只有5mL上柱）（3）阳性添加（100μg/kg→100ng/g样品/2g→200ng/2g）20μg/mL×0.5mL10mL→1μg/mL1μg/mL×0.2mL→200ng注：甲磺酸达氟沙星（C19H20FN3O3▪CH4O3S）：C19H20FN3O3=357.39=78.81%C19H20FN3O3▪CH4O3S453.49盐酸环丙沙星（C17H18FN3O3▪Hcl）：C17H18FN3O3=331.35

5、=90.09%C17H18FN3O3▪Hcl367.812.1测定步骤2.1.1试料的制备绞碎后的供试样品、空白样品、空白添加试料样品2.1.2提取取（2±0.05g）试料，置50mL离心管中，加磷酸盐缓冲溶液10.0mL，10000r/min匀浆1min。匀浆液转入离心管中，中速振荡5min，离心（肌肉、脂肪10000r/min5min；肝、肾15000r/min10min），取上清液，待用。用磷酸盐缓冲溶液10.0mL洗刀头及匀浆杯，转入离心管，洗残渣，混匀，中速振荡5min,离心（肌肉、脂肪1

6、0000r/min5min；肝、肾15000r/min10min）。合并两次上清液，混匀，备用。2.1.3净化固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2mL预洗。取上清液5.0mL过柱，用水1mL淋洗，挤干。用流动相1.0mL洗脱，挤干，收集洗脱液。经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定。2.1.4色谱条件流动相：0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液—乙腈（82+18，v/v），使用前经微孔滤膜过滤;流速：0.8mL/min；检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm；进样量:20μL3

7、测定方法灵敏度、准确度、精密度3.1灵敏度达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星在鸡和猪的肌肉、脂肪、肝脏及肾脏组织中的检测限为20μg/kg，最大残留限量为100μg/kg。3.2准确度本方法在20μg/kg~500μg/kg添加浓度的回收率为60%~100%。3.3精密度本方法的批内变异系数≤15%，批间变异系数≤20%。