临床医学毕业论文有氧运动对衰老模型大鼠心肌细胞凋亡及bcl2和bax蛋白表达的影响.doc

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1、XX大学毕业论文有氧运动对衰老模型大鼠心肌细胞凋亡及Bel2和Bax蛋白表达的影响姓名：2014年6月25日有氧运动对衰老模型大鼠心肌细胞凋亡及Bel2和Bax蛋白表达的影响【摘要】H的探讨有氧运动对衰老模型大鼠心肌细胞凋亡及Bel2和Bax蛋白表达的影响。方法建立衰老大鼠模型，随机分为对照组和两组运动组，运动组分别给予6次/w、3次（隔口）/w游泳训练，每次持续90min,训练12w,于末次训练48h后处死动物，TUNEL法检测心肌细胞凋亡，免疫印迹法检测心肌Bel2、Bax的表达，并计算Bax/Bcl2的比值。结果与对照组相比，两组运动组心肌细胞凋亡指数（AI）

2、均显著降低（PV0.01）,Bel2蛋白表达显著升高（PV0.01）,Bax蛋白表达降低（PV0.05）,Bel2/Bax显著升高（PV0.01）；与6次/w运动组相比较，3次/w运动组心肌AI降低（P<0.05）,Bel2升高（P<0.05）,Bax降低（P<0.05）,Bel2/Bax升高（PV0.05）。结论长期有氧运动使Bel2/Bax比值优化，降低心肌细胞AI,促进心肌细胞存活，延缓心肌衰老；隔日有氧运动效果更佳。【关键词】有氧运动；衰老模型；细胞凋亡；蛋白质Bel2；蛋白质Bax研究表明细胞凋亡通过破坏重要的不能再牛的细胞对衰老起负面影响（1）,伴随衰老

3、的发生，心肌、脑组织、肾上腺等多种组织器官的细胞凋亡过度增加（2）,推进衰老进程。因此，能够减少或抑制衰老机体屮细胞凋亡过度增加的干预手段将有助于延缓衰老。本实验从细胞凋亡的角度探索有氧运动对于抗衰老的应用价值及其机制。1材料与方法1」实验动物选取雌性SD大鼠40只（江苏大学医学实验动物屮心提供）,其屮21月龄8只（自然衰老组），体重390〜410g；3月龄32只（随机分成青年组8只和模型组24只），体重190〜210go实验动物分笼饲养，每笼8只，自由饮水，不限制饮食，饲料为标准啮齿类动物饲料，室温18°C〜23°C,相对湿度41%〜57%,适应性饲养1w后造模。

4、1.2造模D半乳糖用生理盐水配成浓度为5%的注射液，模型组大鼠腹部皮下注射D半乳糖每天500mg/kg,青年组腹部注射相同剂量的生理盐水。连续注射42d。青年组、F1然衰老组和单纯模型组（随机选取模型组8只）禁食12h后处死，取左心室游离壁全层心肌组织，TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,判断造模是否成功（3,4〕。1.3造模后分组及运动训练造模成功后，衰老模型SD大鼠随机分为3组，为对照组，3次/w、6次/v运动组，每组8只，运动为无负重游泳，每次持续90min,水温31°C〜33°C,水深60cm,人工控制大鼠不停地游泳。对照组放入同样温度的浅水屮，以避免水温对

5、大鼠产生的刺激差异，第1天游泳时间为30min,以后每天增加10min,直至达到90min后，保持不变。每次训练结束后，动物能自己抖干身上的水，无疲劳症状出现，共训练12wo1.4指标检测1.4.1主要试剂细胞凋亡检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；Bel2—抗、Bax—抗（SantaCruz公司，美国）；辣根酶标记抗大鼠IgG（北京屮杉金桥生物技术有限公司）；ECLPlus（AmershamBioscicnccs）。1.4.2标木收集末次运动后48h,断颈处死大鼠。取左心室前壁全层心肌组织，分为两份，一份即刻存至・70°C冰箱，用作免疫印迹检测；一份用4%多

6、聚甲醛固定24h后蔗糖沉淀过夜，取左心室近心尖处心肌组织作10pm厚冰冻切片，每个标本取两张不连续切片，用作TUNEL检测。1.4.3TUNEL法检测心肌细胞凋亡新鲜配制3%双氧水室温处理标本片10min,取TDT和DIGdUTP各1pl加入18pl标记缓冲液滴加于切片，37°C标记2h；封闭液封闭室温30min,生物素化抗地高辛抗体37°C反应30mimSABC稀释液反应30min,DAB显色，苏木素轻度复染，脱水，透明，封片，显微镜观察。正常心肌细胞核呈蓝色，凋亡阳性细胞核呈棕黃色。每只大鼠观察两张切片，每张切片计数5个高倍视野(x400)屮的凋亡阳性细胞数。凋

7、亡指数(apoptosisindex,AI)=凋亡阳性细胞数/总细胞数。1.4.4免疫印迹法检测心肌组织屮Bax、Bel2的表达①蛋白样站的制备：取冻存的心肌标本100mg,加裂解液1ml及PMSF,proteaseinhibitorcocktail,phosphataseinhibitorcocktail各10pl,冰上匀浆30min,4°C12000r/min离心15min,取上清，测定蛋白浓度后与等体积2x上样缓冲液混匀后煮沸3min,・20°C保存以备用。②免疫印迹：按照实验室常规方法配制10%SDSPAGE,以总蛋白量30gg/lane上样,电泳；转膜