番茄褐斑病菌毒素对番茄叶片几种酶活性的影响.doc

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1、番茄褐斑病菌毒素对番茄叶片几种酶活性的影响　　摘要：以不同抗病品种的番茄幼苗为试材，研究了番茄褐斑病菌毒素对番茄叶片POD、PAL及PPO活性的影响、结果表明，抗、感病品种番茄幼苗用毒素处理后。POD、PAL、PPO活性均比对照有所提高，且随处理时间延长，其活性变化呈先升高后降低趋势，即POD活性在处理后0～24h逐渐升高，之后下降，PPO和PAL活性在处理后0～36h升高，而后活性下降：随毒素浓度增加，POD、PAL、PPO活性变化也呈先升高后降低趋势：3种酶活性与品种抗病性呈正相关关系。　　关键词：番茄褐斑病菌；毒素；酶活性　　中图分类号：

2、S436.412.1+9　文献标识码：A　文章编号：0439-8114(2009}02-0338-02　　　　番茄褐斑病近几年在河南、广西、浙江等地病情发展迅速，危害日益严重，成为保护地番茄生产的主要病害之一，急需解决。陆宁海、徐瑞富等在进行病原鉴定及生物学特性、发病规律和化学防治研究时发现，番茄褐斑病菌产生的毒素在病害发生发展过程中起重要作用。各类病原物侵染寄主植物可引起一些酚类代谢相关酶活性增强，其中最常见的是苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)，这些酶活性的变化与植物的抗病机制有密切关系。目前，番茄对褐斑病

3、菌及其毒素的抗性机理尚不十分清楚。本文用番茄褐斑病菌毒素处理不同抗病品种番茄的幼苗，研究其叶片POD、PAL、PPO活性变化的特点，以探明番茄抗褐斑病菌毒素的生理机制，寻求简便实用的生理、生化指标，为抗病性鉴定和遗传分析提供理论依据。　　　　1材料与方法　　　　1．1供试菌种和番茄品种　　番茄褐斑病菌由河南科技学院植物病理实验室提供。番茄抗病品种为皖粉3号，感病品种为夏丰。　　　　1．2病菌粗毒素液的制备　　将番茄褐斑病菌在PSA平板上扩大培养后，用挑针或刮刀取5mm×5mm的菌丝块，接种于盛有150mLPSC培养液的250mL三角烧瓶中，每瓶

4、5块，在25℃下振荡培养15d。培养液用5层纱布过滤后，在60℃水浴锅中加热10min，6000r・rmin-1离心20min，取上清液于121℃灭菌15min，即为病菌粗毒素液。　　　　1．3番茄幼苗处理　　采用幼苗浸渍法，即取4～5叶期的幼苗，洗净根部。放人盛有300mL粗毒素液的烧杯中，置于室温下。在粗毒素液处理0～5d定期取样测定生理生化指标，重复3次，同时设蒸馏水为对照。　　　　1．4酶液的提取和酶活测定　　参照李靖的方法，制备POD、PPO和PAL酶测定液。　　POD活性测定：在小试管中依次加入0.2mol・L-1、pH值5.0的醋

5、酸缓冲液1.95mL，0.1％邻甲氧基苯酚1mL，酶液0.02mL，0.08％的过氧化氢溶液1mL，对照将过氧化氢改为1mL无离子水。从加入过氧化氢的那一刻开始计时，60s时在470nm波长下测吸光值。　　PAL活性测定：在小试管中依次加入0.15mmol・L-1、pH值8.8的硼酸缓冲液2mL，56.25μmol・L-1_苯丙氨酸0.95mL，酶液0.05mL。对照将酶液改为0.05mL蒸馏水。30℃下反应30min，在290nm波长下测吸光值。　　PPO活性测定：在小试管中依次加入0.02mol・L-1的邻苯二酚溶液1.5mL，酶液0.01

6、mL，另取一试管，加前两种溶液，不加酶液，加无离子水0.01mL作为对照，在30℃下反应2min，398nm波长下测吸光值。　　　　2　结果与分析　　　　2．1病菌毒素对番茄叶片POD活性的影响　　由图1可知，番茄幼苗经病菌毒素原液处理后，番茄子叶片中的POD活性随时间的延长呈先升高后降低的趋势，且在处理1d时活性达到高峰。其中抗病品种皖粉3号POD活性始终高于感病品种夏丰，3d后才降到最低，此后略有上升，感病品种夏丰POD活性2d后降到最低。　　　　2．2病菌毒素对番茄叶片PAL活性的影响　　由图2可知，番茄幼苗经病菌毒素原液处理后，番茄子叶

7、片中PAL活性随时间的延长呈先升高后降低的趋势，且在处理2d时活性达到高峰。抗病品种皖粉3号PAL活性始终高于感病品种夏丰，PAL活性在4d后均降到最低。　　　　2．3病菌毒素对番茄叶片PPO活性的影响　　由图3可知，番茄幼苗经病菌毒素原液处理后，番茄子叶片中PPO活性随时间的延长呈先升高后降低的趋势。抗病品种皖粉3号PPO活性始终高于感病品种夏丰，在处理2d时达到活性高峰，感病品种夏丰在处理3d时活性达到高峰，PPO活性在4d后均降到最低。　　　　3小结与讨论　　　　一般认为，过氧化物酶(POD)在植物抗病性中的作用与细胞壁的加固有关。有报道

8、指出，在病原菌侵入后，POD在细胞壁多聚物的交联反应中起作用。苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苯丙烷类代谢的关键酶，当细胞受侵时，它能促进抗菌物质(绿原酸、