本科寄生虫综合性实验.ppt

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1、Comprehensiveexperiment综合性实验-Examinationoffaeces粪便检查PurposeandRequirementsMaster:①Directfaecalexaminationinsaline粪便直接涂片法②Iodinestain碘液染色法③Saturatedsaltfloatationtechnique饱和盐水浮聚法Familiarwith①ModifiedKato’sthicksmearmethod改良加藤厚涂片法（厚涂片透明法）②Naturalsedimentationmethod自然沉淀法（水洗自然沉淀法）Directfaecale

2、xaminationinsaline粪便生理盐水直接涂片法主要用于检查原虫滋养体和包囊、蠕虫虫卵或幼虫，对观察溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫和结肠小袋纤毛虫的活滋养体特别有用。也可用于痰、尿、阴道试子、十二指肠抽出物、脓肿、组织活检和乙状结肠镜检查。本法操作简单，但检出率低，可连续三次涂片检查以提高检出率。操作：在清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，取少许粪便（约绿豆大小）置水滴中，涂成均匀粪膜，去除大块粪渣，加盖片，避免空泡出现和液体溢出。粪膜厚度以透过涂片能辩认书上字迹为宜。（1）拿玻片时应用手指夹着玻片的边缘，勿以指面接触玻片面，以避免油渍污染；（2）取粪量以绿豆大小为宜，

3、涂片厚薄要适宜；（3）镜检时应按一定顺序检查，使整个涂片无遗漏地被观察到；（4）掌握多种虫卵、滋养体及包囊的基本结构，以便与粪渣中易混淆的物体相鉴别，避免误诊和漏诊。Directfaecalexaminationinsaline粪便直接涂片法操作：用碘液代替生理盐水，其它操作及注意事项与生理盐水直接涂片法相同或在直接涂片法的标本上，于小盖片的一侧以吸管滴进一小滴碘液，待碘液渗进粪膜即成。主要用于检查原虫包囊如阿米巴、贾第虫包囊等。注意：及时观察，碘染效果才佳。Iodinestain碘液染色涂片法操作：用竹签取约花生米大小的粪便置漂浮管内（用青霉素瓶代替亦可），加饱和盐水少许

4、（约为容器1/3），用竹签搅匀，加饱和盐水至管口，挑去大块粪渣，再缓慢滴加饱和盐水至液面略高于管口，满而不溢，管口上放一张载玻片，与液面接触，静置20-30分钟后，将载玻片迅速提起并翻转，加盖玻片，镜下观察。原理：利用比重大的饱和盐水使虫卵上浮而集中于液面，适于检查线虫卵，对钩虫卵效果尤佳。注意：粪便量要适中，花生米大小；液面要略高于管口而不溢出为宜；静置时间要充分；玻片要清洁无油，要与液面接触。Saturatedsaltfloatationtechnique饱和盐水浮聚法Saturatedsaltfloatationtechnique饱和盐水浮聚法操作：①先将玻璃纸剪成大

5、小为20×30mm的小片，浸于甘油-孔雀绿溶液（含纯甘油100ml，水100ml和3%孔雀绿1ml）中，浸泡24小时以上，直至玻璃纸呈现绿色。②用大小为4×4cm的100目的尼龙网覆盖粪便标本，用塑料刮片在网上刮取粪便约50mg（相当于黄豆大小，如要计数，改用定量板），置于载玻片上，用浸透甘油-孔雀绿溶液的玻璃纸片覆盖于粪便上，轻压使粪便展开成20×25mm的涂面，置30-36℃温箱中约半小时或25℃约1小时，待粪膜稍干后镜检。本法适用于各种粪便内蠕虫卵的检查及计数，方法简便，操作过程中虫卵不会散失，检出率比直接涂片法高。ModifiedKato’sthicksmearme

6、thod改良加藤厚涂片法（厚涂片透明法）注意：玻璃纸浸泡时间要充分；粪膜透明时间要适度，时间不够，粪膜透明不好，虫卵难以发现，时间太长则虫卵变形，不易辨认。ModifiedKato’sthicksmearmethod改良加藤厚涂片法（厚涂片透明法）原理：主要用于比重大于水的蠕虫卵检查。由于虫卵重，下沉于水底而使虫卵集中，经过水洗后，视野较清晰，易于检出，但操作费时、费水，较繁琐。Naturalsedimentationmethod自然沉淀法（水洗自然沉淀法）操作：取粪便20-30g(约乒乓球大)置于杯中加水调成混悬液，经60目铜筛过滤于500ml锥形量杯内，用清水冲洗筛上残

7、渣，直至量杯将满，静置20-30分钟，倾去上液，留沉渣，再加清水静置沉淀，如此反复3-4次直至上液清晰为止，最后倾去上液，留渣、吸取沉渣涂片镜检。注意：静置时间要充足；倾去上层液体要小心，要留下沉渣。Naturalsedimentationmethod自然沉淀法（水洗自然沉淀法）实验操作过程要求：1.在实验操作过程中，每人应注意避免污染，包括显微镜、实验室地面墙面桌面凳子等、自身及他人衣物等，用过的竹签、玻片、漂浮管、量杯、手套、口罩、未用完粪便及装粪便的容器或袋子等务必投入指定的容器内。2.在操作过程中，不要大声