粪大肠菌群检验记录.doc

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1、粪大肠菌群检查实验记录品名批号物料编码规格来源取样日期代表量检验日期报告日期检验编号检验依据1、粪大肠菌群检验记录仪器设备名称：电热恒温培养箱仪器设备型号：DHP-500生理盐水的配制：8.5g氯化钠加1000ml蒸馏水溶解待用（121℃灭菌30min）。（1）恒温培养箱：36℃±1℃。（2）冰箱：2℃～5℃。（3）恒温水浴箱：46℃±1℃。（4）天平：感量0.1g。（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。（6）无菌锥形瓶：容量500mL。（7）无菌

2、培养皿：直径90mm。（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。1、操作步骤（1）初发酵选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液。每个稀释度接种三管月桂基磺酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。（2）复发酵用接种环从所有48h±2

3、h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于已提前预温至45℃的EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管放入于带盖的44.5℃±0.2℃恒温水浴箱内，水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养24h±2h，记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。（1）取225ml生理盐水于标签为1:10的300ml锥形瓶中，取9ml生理盐水于标签为1:100的50ml锥形瓶中。（2）LST溶液的配制：取LST7.1g加水100ml（双料），溶解至透明，倒入10ml于3只标有1g的并放有聚

4、气管的试管中;剩余溶液加一倍水配成单料倒入标有0.01g，0.001ml的6只试管中，每只10ml,并放有聚气管(试管要求180×18mm)。（3）以上1和2；同时一起灭菌，灭菌起始时间(喷气开始计时)：压力表指针回零后打开放气阀，开盖取出，冷至常温。（4）样品稀释：于225ml灭菌的生理盐水中加入样品25g，混匀，配成1:10的稀释样；从1:10的稀释样中取1ml到入标有1:100的9ml灭菌的生理盐水中混匀，配成1:100稀释样;从1:100的稀释样中取1ml到入标有1:1000的9ml灭菌的生理盐

5、水中混匀，配成1:1000稀释样;（5）初发酵试验：每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐蛋白胨（LST）肉汤。取1:10的稀释样1ml于标有0.1g的3只试管中，取1:100的稀释样1ml于标有0.01g的3只试管中，取1:1000的稀释样1ml于标有0.001g的3只试管中，（6）BGLB溶液复发酵试验：配制BGLB溶液，称取BGLB4g溶液100ml水中，均分倒入对应产气标号的标有标示并放有聚气管的试管中，放入灭菌锅灭菌15min。用接种针粘一环产气管液于标有对应的以灭菌的BGLB溶液的试管中，于36℃的

6、培养箱中培养48h稀释度接种量产气情况BGLB肉汤培养后产气情况阴性对照原液0.1g（ml）0.01g（ml）0.001g（ml）检索MPN表结论：备注：检验员：复核员：