大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定.doc

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1、大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水

2、解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。以分离酸度不同的蒽醌苷元。也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素

3、＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。三、实验方法1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g加20%H2SO4100ml，乙酸乙酯250ml，水浴回流2h，稍冷过滤乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml）碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层乙酸乙酯层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节pH=2，放置0.2

4、5%NaOH溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或取三次（40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层乙酸乙酯层丙酮精制滴加浓盐酸，调5%NaOH溶液萃橙色结晶（大黄素）节pH=2，放置取三次（40ml/次）沉淀物调pH=2,沉淀过滤（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水

5、层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。3.游离蒽醌的分离和精制（1）将乙酸乙酯提取液置500ml分液漏斗中，用5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml），合并碱液，在搅拌下滴加浓盐酸，调节pH=2，放置，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，得深褐色粉末，主为大黄素。沉淀干燥后，样品加冰醋酸10ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。（2）大黄素的分离和精制经NaHCO3溶液提取的乙酸乙酯液，继用5%NaHCO3萃取三次，每次用量40ml，合并

6、酸碱，在搅拌下滴加浓盐酸，调节pH=2，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热熔，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。（3）芦荟大黄素的分离和精制经Na2CO3提取过的乙酸乙酯液，再用0.25%NaOH溶液提取三次，每次用量40ml，合并后的碱液同（1）法处理。萃取液经酸化后析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，用10ml乙酸乙酯精制，得黄色针晶的芦荟大黄素。（4）大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离和精制萃取除去芦荟大黄素后余下的乙酸乙酯层，再用5%NaOH溶液萃取多次（每次100ml），至碱水液呈

7、无色为止，合并碱水层，加盐酸至呈酸性（pH2~3），析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚的混合物。将此混合物溶于乙酸乙酯，用硅胶柱色谱分离。（5）柱层析分离大黄酚和大黄素甲醚装柱取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，装入100~200目硅胶（约1/3高，湿法装柱）。上样将样品置于小蒸发皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。洗脱将色