心脏灌流PPT课件.ppt

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1、离体心脏灌流CardiacPerfusioninVitro南京医科大学生理学系韩莹.离体心脏灌流的基本原理将动物的心脏从体内取出放入特定的生理代用液中，根据不同的实验目的和不同种属动物特点进行恒温、通氧或恒温灌流及建立与动物机体内环境基本相似的人工环境，以保证心脏维持正常活动状态。.离体心脏灌流的意义在离体条件下观察并记录心脏的生理活动、病理变化以及各种药物和试剂等施加因素对其生理生化及形态变化的影响。.离体心脏灌流的优点排除在整体情况下体内各种复杂因素的干扰，直接观测离体心脏标本的各项指标。易于严格控制实验环境，方法简便精确，有利于分析作用机制及对

2、药物的药效作定量研究。易于获得准确、精细的结果。.缺点和局限性失去了机体完整统一的内环境和神经体液调控作用，失去了体内各种组织、细胞之间的相互关系，不能完全反映心脏在整体情况下的活动规律与正常整体情况。.离体心脏灌流方法两栖类动物：蟾蜍、青蛙等Straub法、八木法哺乳类动物：大鼠、家兔、猫等Langendroff法.经典的离体蛙心灌流——Straub法灌流途径与正常循环途径不同，蛙心插管通过主动脉瓣直接插入心室腔内，灌流液通过同一蛙心插管进入心室腔和流出，前负荷和后负荷相等。.方法破坏脑脊髓，暴露心脏。2.心室插管3.结扎静脉窦，游离蛙心4.使用张

3、力传感器.5.改变灌流液成分正常的蛙心搏动曲线用0.65％NaCl替换任氏液在任氏液中滴加2％CaCl21-2滴在任氏液中滴加1%KCl1-2滴在任氏液中滴加1:10000肾上腺素1-2滴在任氏液中滴加1:10000乙酰胆碱1-2滴①不能损伤或结扎静脉窦②插管一定要进入心室腔③出现作用后立即用新鲜任氏液换洗三次，以免心肌受损④蛙心插管内液面应保持恒定，以免影响结果注意.八木法离体蛙心灌流特点：灌流途径按正常循环途径设计，一根蛙心插管插入左肝静脉并进入静脉窦，另一根蛙心插管仅插入主动脉，并不穿过主动脉瓣进入心室腔内，可以根据实验要求设定不同的前负荷和后

4、负荷。注意事项①不能损伤或结扎静脉窦；②主动脉内的插管不要过深以免抵住主动脉瓣③两根插管有一定相对位置，插管前要考虑好方向，插管后应避免血管扭曲，保证灌流畅通④避免气泡进人心脏。哺乳类动物离体心脏灌流——Langendorff法Langendorff首次描述了保持哺乳动物离体心脏存活的方法，采用恒压或恒流方式，从主动脉根部逆向用含氧灌流液灌流心脏，这种方式的逆向灌注关闭了主动脉瓣，使得灌注液经冠状动脉分布，并流入冠状窦和右心房。离体心脏灌流实验将动物心脏取出，连接到特定的灌流装置，用灌流液灌注，排除了神经和体液的控制，配合特别分析软件记录心室内压、动

5、脉血压和心电信号，自动分析各项生理参数，用于病理生理情况下的心功能与血流动力学改变等研究，在生理、病理生理以及药理学研究中已得到广泛地应用。能够进行精确恒压或恒流灌注。完善的预热系统和充氧通路能够保证恒温环境和灌流液氧饱和状态，从而有效保持离体心脏的生理活性，使实验顺利进行。可测定心输出量、冠脉流量、左室内压、心率、心电及心肌收缩性能等相关指标，观察药物对哺乳类动物离体心脏活动的影响，研究心肌缺血、缺氧病理损伤机制等。哺乳类动物离体心脏灌流——Langendorff法特点适用于大鼠、豚鼠以及兔的离体心脏灌流实验;u设计科学，结构简洁，可操作性强;u完

6、善预热系统，可与超级恒温水浴相连，充分保证实验恒温环境;u充氧采用上进气模式，有效避免传统下进气模式因药物沉淀底部所导致的气路阻塞;u提供外径为1.8mm和2.2mm两种规格的主动脉插管;u可通过压力换能器连入生物信号采集系统来观察有关指标的变化。实验方法1.麻醉、取出心脏：在戊巴比妥钠麻醉和人工呼吸的情况下迅速取出心脏，置于盛满37℃氧饱和的Ringer’s液的盘中，去除粘附的心包和肺组织，确定主动脉的位置，并恰好在其分支下方切断。2.主动脉插管：将一个玻璃或塑料的插管插入主动脉，注意插管不要过深以免损伤主动脉瓣，结扎固定。3.灌流：将心脏转移到一

7、个双层壁的玻璃浴槽（类似于做离体小肠平滑肌灌流用的恒温浴槽或麦氏浴槽）中，浴槽内加入Ringer’s液或Krebs—Henseheit缓冲液，利用恒温水浴使这一装置保持在37℃。经主动脉插管灌注氧饱和的Ringer’s液或Krebs—Henseheit缓冲液，持续保持适当的灌注压。4.连接记录装置：将一特制的金属小钩固定在心尖部，利用张力传感器与多导记录仪相连并描记心脏收缩曲线和测定收缩力等指标。Langendorff离体心脏灌流装置可用于测定不同种生理学试剂和药物的直接效应，以及对这些药物的拮抗作用。还可观察冠脉流量的变化。取心脏和插管操作需迅速。

8、插管不易过深，以免损伤主动脉瓣。灌流压大小恰当，压力过低则冠状动脉灌流量不足，过高则因主动脉根部过于扩张导致