65食品微生物学检验 乳酸菌检验

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.35—2010食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Lacticacidbacteria2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.35—2010前言本标准代替GB/T4789.35-2008《食品卫生微生物学检验食品中乳酸菌检验》。本标准与GB/T4789.35-2008相比，主要变化如下：——修改了乳酸菌总数、乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌的

2、计数方法。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB4789.35-1996、GB/T4789.35-2003、GB/T4789.35-2008。IGB4789.35—2010食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验1范围本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌（lacticacidbacteria）的检验方法。本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括

3、所有的修改单）适用于本标准。3术语和定义3.1乳酸菌lacticacidbacteria一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属（Lactobacillus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和链球菌属（Streptococcus）。4设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：4.1恒温培养箱：36℃±1℃。4.2冰箱：2℃～5℃。4.3均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。4.4天平：感量0.1g。4.5无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm。4.6无菌吸

4、管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。4.7无菌锥形瓶：500mL、250mL。5培养基和试剂5.1MRS（ManRogosaSharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS培养基：见附录A中A.1。5.2MC培养基（ModifiedChalmers培养基）：见附录A中A.2。5.30.5%蔗糖发酵管：见附录A中A.3。1GB4789.35—20105.40.5%纤维二糖发酵管：见附录A中A.3。5.50.5%麦芽糖发酵管：见附录A中A.3。5.60.5%甘露醇发酵管：

5、见附录A中A.3。5.70.5%水杨苷发酵管：见附录A中A.3。5.80.5%山梨醇发酵管：见附录A中A.3。5.90.5%乳糖发酵管：见附录A中A.3。5.10七叶苷发酵管：见附录A中A.4。5.11革兰氏染色液：见附录A中A.5。5.12莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）：化学纯。2GB4789.35—20106检验程序乳酸菌检验程序见图1。样品25g（mL）+225mL无菌生理盐水10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度，选择2个～3个适宜稀释度，各以选择2个～3个适宜稀释度，各以0.1mL加入到MRS平板0.1mL加入到莫匹

6、罗星锂盐各以0.1mL加入到MC平板进行涂布（Li-Mupirocin）改良MRS平板进行涂布进行涂布厌氧，厌氧，需氧，36℃±1℃，36℃±1℃，36℃±1℃，48h±2h48h±2h48h±2h乳酸菌总数计数双歧杆菌计数嗜热链球菌计数乳杆菌计数乳酸菌总数减去双歧杆菌与嗜热链球菌计数之和挑取双歧杆菌或乳杆菌菌落接种于MRS琼脂平板，嗜热链球菌接种于MC琼脂平板（可选做）菌种鉴定报告图1乳酸菌检验程序图7操作步骤7.1样品制备7.1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。7.1.2冷冻样品可先使其在2℃～5℃条件下解冻，时间不超过1

7、8h，也可在温度不超过45℃的条件解冻，时间不超过15min。3GB4789.35—20107.1.3固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液；或置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:10的样品匀液。7.1.4液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:1

8、0的样品匀液。7.2步骤7.2.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混