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时间：2022-01-09
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1、纸色谱与薄层色谱法实验十五一.实验目的1.了解用色谱法定性分析及提纯化合物的原理；2.熟悉并掌握薄层色谱及纸色谱的基本操作。二.实验原理(1)色谱法色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(分配)的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质,进行反复的吸附或分配的作用,从而使各组分分离.流动的混合物溶液称为流动相；固定的物质称为固定相。根据分离的原理不同,可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等,根据操作条件的不同,又可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等类型。(2)薄层色谱薄层色谱常用TLC表示,按其作
2、用机理可以分为吸附薄层层析,分配薄层层析等,基本原理是当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。分步收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。薄层层析的优点：适用于小量样品（几到几十微克）的分离又可用来精制样品，特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变
3、化而不能用气相色谱分析的物质。(3)纸色谱纸色谱主要用于多功能团或高极性化合物的分析和分离．基本原理是以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。供试品经展开后，可用比移值(Rf)表示其各组成成分的位置，但由于影响比移值的因素较多，因而一般采用在相同实验条件下与对照物质对比以确定其异同。作为药品的鉴别时，供试品在色谱中所显主斑点的颜色（或荧光）与位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。作为药品的纯度检查时，可取一定量的供试品，经展开后，按各药品项下的规定，检视其所显杂质斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。Rf=溶液最高浓度中心至原点中心距离/溶
4、剂前沿至原点中心的距离。纸色谱演示三.实验试剂和仪器甘氨酸、亮氨酸的水溶液，两种氨基酸各取等体积组成混合液，展开剂为5：4：1的水-正丁醇-冰醋酸（体积比），2%的茚三酮乙醇溶液。大试管一支，滤纸（2*15cm）,喷雾器一支，电吹风一把，毛细管（口径1mm）若干支，直尺一把，铅笔一支1%偶氮苯的苯溶液，1%苏丹III的苯溶液，1%的羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ）的水溶液，硅胶Ｇ，9：1的无水苯-乙酸乙酯。研钵一个，台秤，载玻片（7.5*2.5cm）5片，烘箱一个，广口瓶一个。四．操作步骤（
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