动物细胞工程动物细胞培养和核移植技术

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1、回忆：植物细胞工程包括哪些内容？2.2动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养（基础）动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养在治疗烧伤病人时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对一个大面积烧伤的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源不足，而且会产生排异反应。那么，怎样才能获得大最的自体健康皮肤呢？许多动物的细胞能够分泌蛋白质，如抗体等。但是，单个细胞产生的蛋白质量是很少的，怎样才能获得大最的分泌蛋白呢？1、动物细胞培养概念

2、：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。你认为动物细胞培养的原理是什么？细胞增殖动物机体组织单个细胞原代培养稀释分装传代培养胰蛋白酶胶原蛋白酶剪碎请阅读相关内容，思考以下问题：1.动物组织要怎样处理使组织块变成单个细胞？2.什么叫细胞贴壁？3.接触抑制？2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养的过程剪碎、胰蛋白酶或胶原蛋白酶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞进行有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面

3、相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。3.什么原代培养和传代培养？4.细胞在传至10---50代左右时会发生什么变化？人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。一般来说，细胞在传至10---50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，这此细胞已经发生了突变，正在朝着等同于癌细胞的方向发展。目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。贴满瓶壁的

4、细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养的过程动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶(分解弹性纤维)10代细胞原代培养50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液遗传物质细胞株未改变遗传物质细胞系改变2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养的过程思考并回答：1、为什么选用

5、动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？因为动物细胞工程的原理是细胞的增殖，而这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强；便于进行动物细胞培养。成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养，使细胞与培养液充分的接触，有利于培养液的利用，加快了培养的进程。2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养的过程思考并回答：3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？4、在动物细胞培养的过程中，需用到两次胰蛋白酶，作用分别是什么？

6、不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。能否说明动物细胞没有全能性？那说明了什么？2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养的过程5、传代培养的细胞，如果细胞形态发生了变化，这说明了什么？正在朝着等同于癌细胞的方向发展形成单个细胞思考并回答：6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养的培养基有何独特之处？动物细胞培养的培养基主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物

7、细胞培养动物细胞培养的过程P44寻根问底胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？P44旁栏思考题进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白

8、酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养的过程P46讨论多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题：体外培养细胞时需要提供哪些物质及环境条件？无菌、无毒的环境。充足的营养供给2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养的过程适宜的温度、适宜的pH和气体环境。无茵、无毒的环境对培养液