类天疱疮的临床特征与其靶抗原关系的研究-

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1、类天疱疮的临床特征与其靶抗原关系的研究*作者：金岩1，黄懿1，成扬2，付海军3【摘要】对56例江浙沪地区类天疱疮患者的临床特征和不同靶抗原的关系进行了探讨，发现类天疱疮多发于老年人，并以大疱性多见；在BP的急性期抗体结合230kD、230/180kD、合并条带靶抗原较常出现(86.11%)；而在疾病的缓解期抗体结合180kD抗原较常出现(65%)；180kD靶抗原并非次要抗原。【关键词】类天疱疮；临床特征；靶抗原【Abstract】56casesofbullouspemphigoid(BP)werestudiedonth

2、eclinicalcharactersandimmunol-blotpatterns.Itwasfoundthatbullouspemphigoidhappenedmostlyamongoldpeopleinbulloustype；AutoantigenBP230，BP230/180andBP230/180combinedwithminorantigensinvolvedinacutephaseofBPpatient；WhileBP180involvedmainlyintheremissionofthedisease.A

3、utoantigenBP180werenotminorantigen.【Keywords】bullouspemphigoid；clinicalcharacters；autoantigen第11页共11页大疱性类天疱疮(BP)是一种发生于老年人的自身免疫性大疱病，临床表现为全身泛发性、张力性大疱，尼氏征阴性，病程反复迁延，严重威胁患者的生命健康。BP血清中有多种抗皮肤基底膜不同成分的抗体，有靶抗原分子量为230kD、200kD、180kD、140kD、100kD等，为了进一步探讨BP的临床特征和其靶抗原的关系，我们拟对临床

4、收集的56例病例及其免疫印迹的结果综合分析。1材料与方法1.1临床资料1.1.1研究对象选择1999年12月～2001年12月华山医院皮肤科和东方医院门诊、病房就诊的江、浙、沪地区汉族类天疱疮患者，根据临床表现、组织病理和直接免疫荧光检查，符合诊断标准确诊。1.1.2方法我科专病门诊、病房大疱病患者，常规做病理活检，手术时将切下的组织块分为两份，一份做常规组织病理检查，另一份做直接免疫荧光检查；确诊的BP患者抽取外周新鲜血5ml，留血清-20℃冻存用于测定BP抗原分子量；除对患者的一般情况如年龄、性别、发病时间等进行记录

5、外，并根据以下内容对BP病例进行登记、随访。(1)临床类型：根据临术表现将BP分为大疱性、小疱性、局限性和痒疹性等。(2)黏膜损害情况：①有黏膜损害；②无黏膜损害。(3)痒感：①有明显痒感；②无明显痒感。(4)病情：①重度：指不断出现张力性水疱和显著红斑，累及体表面积50%以上；②中度：指皮损面积在20%～50%之间；③轻度：皮疹散在分布或局限在身体某一部位，皮疹面积在20%以下。(5)病期：①活动期：指患者不断出现张力性水疱和显著红斑；②稳定期：无明显水疱发生，只有陈旧皮损。1.2皮肤表皮抗原的提取第11页共11页1.

6、2.1材料1.2.1.1组织取新鲜外科截肢手术皮肤6cm×6cm数块。1.2.1.2主要试剂及仪器三羟甲基氨基甲烷(TRIS，FARCO产品)；苯甲基磺酰氟(PMSF，Promega产品)；依地酸钠(EDTA，Sigma产品)；蛋白酶抑制剂(pepstatin，antipain，leupeptin，chymostotin，Sigma公司产品)；十二烷基硫酸钠(SDS，日本进口分装)；高速低温离心机(HITACHI，日本进口)；751型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；热分离缓冲液；12.5mmolTRIS-HCl，pH6

7、.8，100μlPMSF(热分离前加)；表皮提取液：2%SDS，65mmolTRIS-HCl，pH6.8，20mmolPMSF，10mmolEDTA，含四种蛋白酶抑制剂(热分离前加)。1.2.2方法(1)新鲜外科手术皮肤标本，用图钉固定在木板上，用手术刀除皮下脂肪组织，削真皮至0.5mm厚，冷生理盐水反复冲洗。(2)热分离缓冲液分两份，一份置37℃水浴，另一份置56℃水浴，10min备用。(3)将皮肤剪成2cm×2cm大小，放入37℃热分离缓冲液20min，再迅速放入56℃热分离缓冲液中40s，取出冷却，用手术刀背轻轻分

8、离表真皮。(4)表皮按25～30cm2比1ml的比例加入表皮提取液中，放入组织匀浆器内匀浆(匀浆器放冰中)。(5)匀浆液置塑料管中，于液氮中反复冻融3次，每次10min，后12000rpm离心，4℃，30min，取上清即为表皮提取液，-40℃保存。(6)751分光光度计测定表皮抗原提取液蛋白含量，在595nm处测OD