大鼠抗弓形虫igm抗体酶联免疫分析

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1、大鼠抗弓形虫IgM抗体酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12822r特异性：本试剂盒可同时检测大鼠抗弓形虫IgM抗体，且与其他相关抗体无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法半定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中抗弓形虫IgM抗体含量。说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。试剂盒组成及试剂配制1.酶联

2、板(Assayplate)：一块（96孔）。2.酶结合物（Conjugate）：2×6ml/瓶。3.样品稀释液(SampleDiluent)：2×6ml/瓶。4.阳性对照（PositiveControl）：1×0.5ml/瓶。5.阴性对照（NegativeControl）：1×0.5ml/瓶。6.底物溶液A（SubstrateA）：1×7ml/瓶。7.底物溶液B（SubstrateB）：1×7ml/瓶。8.浓洗涤液（WashBuffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。9.终止液（StopSolution）：1×7ml/瓶。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标

3、仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时，用样品稀释液

4、进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样：分别设空白孔，不加任何溶液；设阴性对照孔2孔，加阴性对照100μl；设阳性对照孔2孔，加阳性对照100μl；余孔加100μl样本稀释液，然后直接加待测样本5μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置30分钟。1.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。2.每孔加酶结合物100μl，充分混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置20分钟。3.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。4.依序每孔加底物溶液A和

5、B各50μl，37℃避光显色10分钟。5.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。6.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。注：1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。4.未使用完的酶

6、标板或者试剂，请于2-8℃保存。5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。计算1.目测法：比临界对照显色深的样本为阳性，比临界对照显色相同或显色浅的为阴性。2.酶标仪测定：判断值（OD值）=阴性对照平均OD值×2.1，样品OD值大于判断值为阳性，小于等于为阴性。阴性对照平均OD值小于0.05时，按0.05计算。注

7、意事项1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。5.在配制检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。6.底物请避光保存。7.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。