植物赤霉素GA说明书

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1、.-植物赤霉素(GA)酶联免疫分析〔ELISA〕试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中赤霉素(GA)含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物赤霉素(GA)水平。用纯化的植物赤霉素(GA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次参加植物赤霉素(GA)，再与HRP标记的赤霉素(GA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的赤霉素(GA)呈正相关。用酶标仪在

2、450nm波长下测定吸光度〔OD值〕，通过标准曲线计算样品中植物赤霉素(GA)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片〔48〕2片〔96〕密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：135pmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1

3、瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液〔20ml×20倍〕×1瓶〔20ml×30倍〕×1瓶2-8℃保存标本要求：1．标本采集后尽早进展提取，提取按相关文献进展，提取后应尽快进展实验。假设不能马上进展试验，可将标本放于-20℃保存，但应防止反复冻融..word.zl-.-2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的〔HRP〕活性。操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100µl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔

4、和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各1..word.zl-.-取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。〔稀释后各孔加样量都为50µl，浓度分别为90pmol/L，60pmol/L，30pmol/

5、L，15pmol/L，7.5pmol/L〕。2.加样：分别设空白孔〔空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作一样〕、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl〔样品最终稀释度为5倍〕。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30〔48T的20倍〕倍浓缩洗涤液用蒸馏水30〔48T的20倍〕倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔参加酶标试剂50

6、µl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先参加显色剂A50µl，再参加显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50µl，终止反响〔此时蓝色立转黄色〕。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度〔OD值〕。测定应在加终止液后15分钟以进展。考前须知：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟前方可使用，酶标包被板后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，

7、并经常校对其准确性，以防止试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高〔样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值〕，请先用样品稀释液稀释一定倍数〔n倍〕后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数〔×n×5〕。5．封板膜只限一次性使用，以防止穿插污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进展，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。..word.zl-.-9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异

8、，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，2..word.zl-.-在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应