抑制作用机制的讨论

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1、抑制作用机制的讨论当归贝母苦参丸出自《金匮要略》，原为治疗妊娠小便难，具有活血补血，化痰散结，清热解毒的功效。与肿瘤的发病正气不足，痰(湿)浊、热毒、瘀血内阻有着共同机制。近年来以用其加味治疗宫颈癌、膀胱癌、前列腺癌取得明显疗效。其中绝大多数研究都是针对下焦癌变进行，而本研究拓展思路，将研究目光转向中焦胃癌。从基因转录水平和蛋白表达水平检测环氧化酶(cyclooxygenase，COX)，Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associatedXprotein，Bax)，抑癌基因(phosphataseandtensinhomologdeletedon

2、chromosometen，PTEN)，在细胞内的表达，探讨当归贝母苦参丸含药血清抑制胃癌细胞SGC-7901的机制，为中医药经方抗肿瘤研究提供理论基础。1材料1.1动物及细胞株SPF级Waster大鼠，合格证号SCXK(甘)2011-0001，体重(18020)g，雌雄各半，由甘肃中医学院科研中心动物实验室提供。饲养条件:室温20～25℃，湿度45%～55%。动物分笼饲养，食标准饲料，饮水自由，饲料由甘肃中医学院科研中心动物实验室提供。人胃癌SGC-7901细胞株购于北京协和肿瘤研究所。1.2药物及试剂当归、贝母、苦参购自甘肃中医学院附属医院。D

3、MEM培养基、胎牛血清(美国HyClone公司)，四甲基偶氮唑蓝(上海华舜生物工程有限公司)，二抗(中杉金桥生物技术有限公司)，RNAisoTMPlus(批号D9810A)，thePrimeSeriptRTreagent，kit(批号DRRO37A)，SYBRPremixExTaqTM(批号DRR081A，英国TakarBio公司)，国产分析纯试剂(北京化学试剂公司)。1.3仪器SW-CJ-1D型超净工作台(苏州苏洁净化设备有限公司)，MCO-18AIC型CO2培养箱(日本三洋公司)，CKX41/U-RFLT50型荧光倒置显微镜(日本Olympus

4、公司)，5804R型高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)，Bio-RadCFX96型荧光PCR仪(美国伯乐公司)。2方法2.1含药血清制备2.1.1中药汤液制备将各复方中药药物饮片浸泡1h，煎煮2次，每次30min，纱布粗滤去渣，药液浓缩为含生药1，2，3gmL-1。2.1.2给药剂量方式及采血方法按完全随机化分组方法，将120只大鼠分为当归贝母苦参丸高、中、底剂量组和空白空白组，每组30只，中药组和空白组大鼠每天分别灌服中药和生理盐水0.01mLg-1，2次/d，均连续给药7d，正常饮食饮水。对每只大鼠于末次给药2h后，乙醚麻醉，腹主动脉

5、采血，3000rmin-1，15min离心分离血清，将各组已取备的30支血清混合，0.22m微孔滤膜过滤，56℃，30min灭活，-80℃保存备用。2.2细胞培养人胃癌细胞株SGC-7901接种于无菌培养瓶中，其中1组加入空白大鼠血清，其中1组加入10%胎牛血清作为空白组，用于检验空白大鼠血清的特异性，其他3组加入不同浓度的含药血清;每组都加入含双抗的DMEM培养基，在37℃，5%CO2，