海栖热袍菌电转化技术的研究

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2011，39(29):17764－17766，17777责任编辑朱琼琼责任校对况玲玲海栖热袍菌电转化技术的研究1，211，311*彭静静，蒋钰瑶，周庆，王未未，邵蔚蓝(1．南京师范大学生命科学学院，江苏南京210046;2．泰山学院生物科学与技术系，山东泰安271000;3．江苏省农业科学研究院农业资源与环境研究所，江苏南京210014)摘要［目的］对海栖热袍菌电转化技术进行研究。［方法］采用不同参数即不同的方型电脉冲参数、指数衰退型电脉冲参数和高电压电击参数对海栖热袍菌感受态细胞进行电转化，得到的转化子进

2、行PCR验证。［结果］试验中发现以150V的低压方形电脉冲，室温厌氧条件下电击25ms、1次，有利于T．maritimaMS8的转化，但这种以整合质粒进行的转化效率极低。［结论］为提高T．maritimaMS8的基因转化效率奠定了基础。关键词海栖热袍菌;整合质粒;电转化;方型电脉冲中图分类号S132文献标识码A文章编号0517－6611(2011)29－17764－03ElectrotransformationofThermotogamaritimaMS8PENGJing-jingetal(SchoolofLifeScience，NanjingNormalUniver

3、sity，Nanjing，Jiangsu210046)Abstract［Objective］TheaimwastostudyontheelectrotransformationofThermotogamaritimaMS8．［Method］Squarewaves，exponentialwavesandhighvoltageshockwereusedfortheelectrotransformationofT．maritimaMS8，andtheobtainedtransformantsweredetectedbyPCR．［Result］Asinglesquareele

4、ctricpulsecouldbeappliedtocellsamplein0．2cmETcuvettesbyusingaBio-RadGenePulsersetat150V，25msatroomtemperature，butthetransformationefficiencywasverylow．［Conclusion］ThisresearchmayimprovethetransformationefficiencyofT．maritimaMS8．KeywordsThermotogamaritimaMS8;Integratingplasmid;Electrotra

5、nsformation;Squareelectricpulse［7］海栖热袍菌(ThermotogamaritimaMS8)，以其80℃的最大鞘状结构被认为是基因转化的天然屏障，因此对海栖热适生长温度，和具有完整的纤维素、半纤维素分解酶系的特袍菌转化技术的研究任重而道远。点，成为基因改造成乙醇生产工程菌的优势出发菌株。只因笔者使用整合质粒pEC，通过尝试各种电转化条件，对它缺少了生产乙醇的相应酶(如乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶)，T．maritimaMS8的转化进行探索，为进一步促进T．maritima可以通过基因工程技术将乙醇生产关键酶基因克隆到T．MS8的基因转化工作的

6、研究奠定基础。maritimaMS8中，以扩展它的乙醇代谢途径，并同时敲除它1材料与方法的有机酸途径，促进乙醇的生产。1．1材料受嗜热细菌本身生长条件的限制，对嗜热菌基因操作技1．1．1菌株质粒及引物。试验所用的菌株、质粒及引物见［1－6］术的研究起步较晚，而海栖热袍菌对数生长期出现的巨表1。表1试验所用的菌株、质粒及引物Table1Bacterialstrains，plasmidsandprimersusedinthetest项目名称相关特性来源SourceItemNameCorrelationcharacteristic菌株StainsThermotogamari

7、timaMS8极度厌氧菌购于ATCC43589r质粒PlasmidspUC19E．coli克隆载体，laz，amp实验室保存pTS1E．coli-Thermotoga穿梭质粒，Cmr实验室保存pECThermotoga整合质粒，Cmr实验室保存引物PrimersTmxi-upcccgaattcaagagagatctcccggtg扩增木糖异构酶基因(xi)Tmxi-downcccatggctccatctcctgaaara-upatgtcctacaggatagtg扩增阿拉伯糖苷酶基因(ara)ara-downttactccaattctacctcaCat-