DNA指纹图谱

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1、DNA指纹图谱DNAFingerprinting一、实验目的1.掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程；2.掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度。3.掌握对DNA指纹数据进行基本统计分析方法。二、实验原理发现：1984年Jeffreys及其同伴人体核DNA的酶切片段人源小卫星DNA用作基因探针由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，具有个体特异性DNA指纹图谱的特点：高度的个体特异性（同卵双胞胎除外）在家族系统中具有稳定的遗传性对于生物个体水平上体细胞的稳定性高度的个体特异性这种图纹几乎没有两个人完全相同，它同人的指纹一样是每个

2、人所特有的，故称为“DNA指纹”。DNA指纹图从形态上看是以一系列不等距离、相互间隔的条带组成，如同现代商品包装上的“条码”。其中每一根条带代表一个(或一个以上)等位基因片段，即代表一特定长度的DNA片段。不同个体之间的差异在图谱中主要表现在谱带密度强弱和条带位置以及条带数目上的差异。基因身份证为孤儿寻亲提供科技支持用DNA指纹图谱作为证据对当事罪犯的指控，已在警方和法庭采用。RodmanDam谋杀案,1988稳定的遗传性DNA指纹图谱同样严格遵守孟德尔遗传定律。子代全部谱带中，必然有一部分来自父亲，一部分来自母亲。因此在亲子鉴定中被广泛的使用。人的血液，毛发唾液等都可以用于亲子鉴定。一

3、个人有23对染色体，同一对染色体同一位置上的一对基因称为等位基因，一个来自父亲，一个来自母亲。如果检测到某个DNA位点的等位基因，一个与母亲相同，另一个就应与父亲相同，否则就存在疑问了。加纳移民案中人物关系：Christiana：母亲Joyce：Christiana在英国的亲生子女Diana：Christiana在英国的亲生子女David：Christiana在英国的亲生子女Andrew：在加纳生活的男孩，被质疑是Christiana的亲生子女Unrelated：与Christiana没有任何血缘关系的人物。Sarbahvs.thehomeoffice加纳移民案例，1985GhanaIm

4、migrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985GhanaImmigrationCase,1985移民局在科学的证据下承认了Christiana和Andre

5、w的母子血缘关系。DNA指纹图谱的制作过程基因组(Genome)DNA经过：1、限制性内切酶消化2、电泳(Electrophoresis)3、SouthernBlotting4、小卫星DNA探针杂交显示出高多态性图谱1234琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是分离，鉴定和纯化DNA片段的常规方法。在基因工程的常规操作中，应用最为广泛。它通常采用水平电泳装置，在强度和方向恒定的电场下进行电泳。DNA分子在凝胶缓冲液（一般为碱性）中带负电荷，在电场中由负极向正极迁移。DNA迁移率2.53.03.54.04.50.20.40.60.81Log(basepair)线性双链DNA分子的电泳规律琼脂糖凝胶

6、可以分离长度为200bp至近50kbp的DNA，DNA分子迁移的速率与分子大小成反比。DNA分子的观察Goldview核酸染料能够嵌入DNA双螺旋分子中，紫外灯下发出绿色荧光，使DNA可见。Goldview三、实验步骤（一）DNA样品的提取和酶切（二）制胶(同学操作开始)（每组4人共用一块胶）（三）点样（四）电泳（五）观察移去梳子手按住两边支点，打开电泳漕把支架放入电泳漕中，注意正负极方向转动移液器推杆调节量程3ul，用力上好枪头，禁止不加枪头使用下压推杆至设定量程，将枪头伸到液面下缓慢松开推杆，液体吸入枪头下压推杆至底，挤出所有液体去枪头的方法使用过的枪头和EP管请弃去不同的样品要使用

7、不同的枪头请在桌面滴一滴水，把水滴从一处移到另一处，枪头尖端不能有空气，练习枪的使用加样的正确操作四注意事项1、电泳结束后，不要倒掉电泳液。2、实验设备及用品清理，归位后，教师检查合格方可离开实验室。3、实验报告请标注报告人点样的DNA条带，判断CS与哪一个DNA样品是同一个样品，找出罪犯。如无法判断，请分析原因。4、实验报告必须填写实验班级号，否则报告无效。5、实验报告请于7月18，19日上午8：00-11：30交到生化楼215房