DB61∕T 412-2007 食品中甘油的测定—酶法(陕西省)

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1、DB61陕两省地万标:住DB们IT412--2007食品中甘油的测定酶法2007…09-03发布2007…09…但实施陕西省质量技术监督局发布DB61rr412…2007"IJ本标准中的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国陕西出入境检验栓度局提出并归口。本标准起直在单位:中华人民共和国陕西出入境检验检疫局。本辑推起草人t欧阳宏、蒋宏伟、陈茂盛、张春山。本标准系首次发布。DB61rr412-2007食品中甘油的测定←一一酶法范自本标准现定了剧酶法测定食品中甘泊的含最。本际准适用于食品中甘榻的~W定。2摆范性亏i用文件.F

2、flj文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引周文件，其随后所有的结改单〈不包括勘误的内容〉浅修订版均不远!书于本际准，然雨，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使周这些文件的最新版本e凡是不注曰期的引用文件，其最新摄本边用于本标准。IFU77(2001)一一一葡萄什中甘捕的测定EBC9.33一一啤酒中甘油的黯定(酶法〉3术语和忘义3.1本栋准中JifT指食品包括:萄酒、穰萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒等海‘.号3.2捋号与缩略i吾iliGK甘油激隅ATP二磷毗甘酸鼠--fADP散背二锅酸PK丙翻酸激酶3

3、4.‘PEP磷最烯醇式丙翻酸!PEP-CHA磷最烯醇式因醋酸单环乙饺盐1L-LDHL…乳酸酶脱氢酶iiNADHß-烟碱咖踉喋岭核昔酸氨1jNAD盘!碱黠I嚷岭二核苛酸el岖'U自每活度国陈单位，在25"C的标准条件卜每minlU的酶活动量转化成11lmolVM事ht'的物展。量'41A吸光度值孟薄FC物质的浓度-毫也3咽，.高溢，、13siza-4原理-''155甘袖在甘?由激酶的催化卜可敲Aτp磷酸、化为3-磷酸甘油脂，ATP转化为ADP:反应式J'.l:GKGlyceroL+ATP叫一一一…..L-glycerol-3-

4、phosphatξ+ADP上式中形成的ADp:在闪酣酸激胞的催化卡.可LjPEP作Hn:生成Aτp及丙翻酸醋:反问式为:DB611T412-2007』PKADP令PEP一…一一一份AτP+Pyruvate丙翻酸睦在L-乳酸摇脱氧酶的作用下可被NADH还原为L乳酸甜，NADH被氧化为NAD;反应式为:L-LDHPyruvate+NADH+Hφ……一一Þ-L翩lactate+NAD'被氧化的NADH的摄取决于甘浊的主敌，NADH的暖光度值可在340nm下翻量。5试剂5.1苦氨酷甘莞酸5.2NADH、ATP、PEP-CHA5.3M

5、gS04'7日O25.4丙酣酷爱;致酶5.5L-乳酸酶院登在西每5.6甘i串激酶景:孚物5.7日Cl5.8NaOH5.9KOH5.10亚性盖住御~Fe(CN)6'3日105.11疏酸特ZnS04'7日205.12重蒸水5.13也可使用商品试齐IJ盒6设备6.1移液检(5mL、1mL、50唰200μL、10-50μL)6.2比色到1:先径l.Ocm6.3紫外分光光度计，可变波长，在340nm;贯IJ;i:E6.4折叠蜡纸，孔径10μm6.5蔑心机6.6离心智、烧杯、移液检配套j摇头、破瑭梅等7检预IJ步骤7.1试赛IJDè制7

6、.1.1甘鲸酸甘藏酸缓冲液:称0.66g甘氢歌甘氨最济丁'90乱中，J斗jNaOHi建;'j'ipIH直至~7.4，定学手至lOOmL7.1.2辅黯及提;中渣的j昆和物:骂立11mLi宁主主酣，j::j氨般缓泞液，~容解NADH扮7mg;ATP约22mg:PEP-c}队的11mg;加入lmol儿的班gSO，•7日O~4mL2hh涩罩'、户善DB61fT412-2007zez也a事'雹句、飞GJAFSZ7.1.3离醋慧、激辑、L裴攘攘段蘸捣盛j孚嗨t'hz‘，近万它主m时，lmL重蒸本溶解600U自黯般激梅子崭及550UL一乳

7、酸撞段氢酷。7.1.4苦?由激辈革悬浮费:磊罢?$32肩1mL重蒸Jj(洛辑部口的甘浩激酶。革哽惫';写7.1.5HCl:2mollL7.1.6NaOH:2mo万LzaA窍，验7.1.7KOH:2molILo'117.1.8Carrez澄清液33Fjπ312S7.1.8.1Carrez…[溶液85mmo盯LCarrez-1榕液:称取3.60gK4Fe(CN)6.3日20，加入100mL蒸馆水溶解。导B?7.1.8.2Carrez-II~容液最FTA￡250mmo1!LCarrez-II榕液t称取7.20gZNS04'7H20

8、，加入100mL燕惯71<.府解。;ji临使用时，等量加入Carrez-1晦液和Carrez-11…榕液，充分汹匀即为Carrez洛液。J-47.2试样制备337.2.1无色或浅色果汁-HAqw4ayJ、喝用KOH调整25ml果汁pH值至7r~8，加;重茶水稀释，使用1.000烹1.800