裂解液配制方法

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1、1、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1.AmmoniumChloridex10LysingConcentrateSolutiona)NH4Cl(1.5M)80gb)KHCO3(100nM)10gc)Na4EDTA(10nM)3.7gd)DistilledH2O1000mL2.1NHClor1NNaOH（调节pH值用）配制步骤：1.将以上a、b、c试剂溶于900ml去离子水中；2.调节溶液pH值到7.2-7.4，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。保存：1.10x储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.

2、在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。2、ripa裂解液NP-40orTriton-1001%TrisHCl(pH8.0)50mmol/LNaCl150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂)1μmol/L(0.7μg/ml)Leupeptin（亮抑制肽）0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LH

3、EPES(pH8.0)；Leupeptin贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液?（Tris－HCL）1．1MTris溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。2．1MTris－HCLPh=8.0溶液的配置取1MTris溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。3.0.5MEDTA溶液的配置称EDTA－Na237.2g先用140mlddH2O溶解，加入14mlNaOH（10M）使EDTA－N

4、a2溶解，再用NaOH（10M）溶液调至Ph=8.0，加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。4.细胞裂解液的配制称15gCTAB（Hexadecyltrimethylammoniumbromide）（先用约600mlddH2O加热溶解）放入烧杯中，加入75ml1MTris－HCL（Ph=8.0），58.5gNaCL（先用少量ddH2O溶解），30ml0.5MEDTA，定容至1000ml，混合均匀备用。4、组织裂解液配方：`7M?Urea(60.06)???4.2042g2M????thiourea(76.12)?1.5224?g100mM?DTT??????

5、????0.1543?g4%?????CHAPS???????0.4????g0.5mM??EDTA????????0.00146g40Mm???Tris?????????0.0485?g2%(v/v)??NP-40???????0.2???ml1%(v/v)??TritonX-100??0.1???ml5mM?PMSF用前加????0.00871g2%pharmalyte??????????0.2ml共10ml分装成400μl/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞

6、质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA线粒体：RIPA